简述流式细胞仪检测原理（一）

● 1934Moldavanl:Firsttry(固定式细胞分析-流动式)；

●1953Crosland-Taylor:鞘流系统(解决难题)；

●1956Coulter原理(血细胞计数器)；

●1965Kamentsky:分光光度计定量细胞成分和散射光应用；

●1967Kamentsky等设计了细胞分选的装置；

●1969Vandilla等:第一台荧光检测细胞计(鞘流聚焦、激光)；

●1972斯坦福大学:研制出荧光激活细胞分选仪(FACS)；

●1973BD公司与斯坦福大学合作，研制生产第一台商用流式细胞仪-FACSⅠ。

●1975Kohler和Milstein:单克隆抗体技术(促进流式发展)。

……

流式细胞仪进入商品化时代，发展日新月异。

流式细胞仪按照是否有高速分析功能，可分为分析型仪器（临床型）和分选型仪器（科研型）。分选型仪器在细胞分析的基础上增加了细胞分选系统，除了可以进行流式细胞分析以外，还可以进行高速细胞分选。

●分析型流式细胞仪：细胞样本分析后最终进入废液桶，不能回收利用。

●分选型流式细胞仪：既能流式分析，还能对分析的目的细胞进行分选；但由于进样管道较长，还需要保持无菌状态，所以分选型流式细胞仪一般只用于分选。

流式细胞仪主要由以下四部分组成：

●液流系统：流动室、液流驱动系统

●光学系统：激发光源、光束收集系统

●电子系统：光电转换器、数据处理系统

●细胞分选系统：喷嘴、电偏转板、样本收集器

由于流式细胞仪的激发管理是固定的，一般与细胞悬液的轴心正交，这就要求细胞在必须在流经激光聚焦区时不能偏离其轴心，且不能聚集成团，阻塞管路，否则光束无法准确照射细胞中心，造成信号不稳定。流式细胞仪液流系统成功解决了上述问题

流式细胞仪通常以激光作为激发光源，经过聚焦整形后的光束垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管（PMT）接收。荧光信号的接收方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号，经光电倍增管接收后可转换为电信号。

电子系统组成包括：

●光电检测器：将光信号转换成电子信号。

●前置放大电路：将信号等比例放大，输出电脉冲信号。

●模数转换器：将模拟的电脉冲信号转换成数字信号。

●数据处理系统：计算机系统数据采集、分析。

（1）流式细胞仪常用两类光电检测器：

光电二极管及光电倍增管，光电二极管(photodiode)，光灵敏度低，测定强信号（FSC）；光电倍增管(photomultiplier,PMT)光灵敏度高，测定弱信号（SSC,FL1,FL2,FL3,FL4)

（2）电信号两种放大方式

由于光信号比较弱，需将其等比例放大，方便计算机分析处理，一般信号的放大可以使用线性或对数两种方式。

一般FSC和SSC变异范围较小，故使用线性放大；荧光信号变异范围较大，多使用对数放大。