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（3）光信号的检测与分析 A、通道(channel)：一个光电检测器就是一个通道，有多少个光电二极管/倍增管，就有多少个通道：散射光通道（FSC通道和SSC通道）、荧光通道。 通道命名方式：以FL(fluorescence)加数字命名，如FL1、FL2、FL3等。也可以该通道接收的主要荧光素命名，如FITC通道、PE通道、APC通道等。例如：FACSCalibur有488nm和633nm两根激光器，488nm能检测FSC、SSC、FL1(FITC)、FL2(PE)、FL3(PerCP)，635能检测FL4(APC)，代表Calibur有6个通道，最多能同时检测4个荧光，6种参数 B、光信号的类型：包括散射光信号和荧光信号 a)散射光信号：与标记荧光素无关，是细胞的固有参数。 ●前向散射光(forwardscatter,FSC);FSC信号方向与激光束平行，偏离度一般在1-6度范围内，亦称小角度散射光，主要反映被测细胞的体积大小和活力 ●侧向散射光(sidescatter,SSC).SSC方向与激光束和液流形成的平面相垂直，亦称90度散射光，其信号强度反映细胞内部颗粒度和精细结构的变化 实验中，常利用FSC和SSC这两种参数的组合，区分不同的细胞群体，去除碎片、死细胞和粘连细胞的干扰。
b) 荧光信号 ●自发荧光：细胞在激光照射下发出微弱的荧光 ●特异荧光：标记的荧光素分子发出的荧光，比自发荧光强很多倍 常用荧光素 ●<499nm蓝色荧光（Blue）；500-549nm，绿色荧光（Green）； ●550-584nm，黄色荧光（Yellow）；585-615nm，橙色荧光（Orange）； ●616-700nm，红色荧光（Red）；≥700nm，远红外荧光（Far-Red）
（4）FCM数据显示与分析 A、常用分析软件 ●CellQuest ●Diva ●FlowJO ●WinMDI ●FCSExpress B、流式细胞术的的数据显示方式包括 a) 单参数直方图(Histogram) b) 双参数数据显示： ●散点图(DotPlot) ●伪彩图(Pseudo-colorPlot) ●等高线图(ContourPlot) ●密度图(DensityPlot) ●假三维图(Pseudo3DPlot) c)三维图(3DPlot) （四） 细胞分选系统 （分选型流式细胞仪） 高速流式细胞分选仪均采用电荷式细胞分选的原理，在分选过程中，给予液流高频震荡（15-100kHz），使液流断裂为打消均匀的液滴，液滴在喷嘴下面与液流分离，瞬间加电，带正电荷或负电荷的液滴经过电场作用后会发生偏转，从而可以将感兴趣的细胞分选出来。 电荷式分选仪主要由以下几部分组成： ●超声振动器(15-100kHz) ●液流充电系统 ●高压偏转板 ●收集装置(流式管、培养板)
随着流式细胞术应用范围不断扩大及其临床试剂的大力开发，流式细胞仪已成为医院及医学独立实验室基础建设的设备之一，流式细胞术发展趋势可归纳为： ①流式细胞仪从单纯大型仪器发展为适应各种实际应用的便携式、台式、高分辨率、高质量分选的研究型流式细胞仪； ②对流式细胞术检测荧光参数，从采用荧光单色、双色分析发展为多色分析，目前最多可同时检测15种荧光信号； ③从检测参数的相对定量发展为绝对定量； ④从检测参数的手动人工分析发展为利用计算机软件的自动分析； ⑤所采用的荧光试剂，从非配套试剂发展为配套的试剂盒试剂。 参考书籍 •《临床流式细胞分析》王建中主编。上海科学技术出版社。2005.8 •《流式细胞术基本原理与实用技术》梁智辉编。华中科技大学出版社。2008.6 •《临床流式细胞学检验技术》吴丽娟主编。人民军医出版社。2010.8 •《实用流式细胞术-血液病篇》刘艳荣主编。北京大学医学出版社。2010.9 |
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