EB病毒感染实验室诊断及临床应用专家共识解读（上）

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EB病毒(Epstein－Barr virus, EBV)为疱疹病毒科，疱疹病毒IV型，是一种嗜人类淋巴细胞的疱疹病毒。EBV是双链DNA病毒，基因组长约172kb，在病毒颗粒中呈线性分子，进入受感染细胞后，其DNA发生环化并能自我复制。淋巴细胞中潜伏感染的EBV可表达2种不翻译成蛋白质的RNA(即EBV-encoded RNAs, EBERs)，包括EBER1和EBER2，6种核抗原(EBNA1、EBNA2、EBNA3A、EBNA3B、EBNA3C和LP)，2种潜伏期膜蛋白(潜伏膜蛋白，latent membrane protein, LMP)，包括LMP1、LMP2A/B。

EBV在人群中感染非常普遍，约90%以上的成人血清EBV抗体阳性。除原发性EBV感染可致传染性单核细胞增多症(infectious monon－ucleosis, IM)外，EBV还引起慢性活动性EBV感染(chronic active EBV infection，CAEBV)和EBV相关噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(EBV-associated haemophagocytic lymphohistiocytosis，EBV-HLH)等非肿瘤性重症EBV相关疾病。EBV还是一种致肿瘤病毒，与许多肿瘤的发生相关，如霍奇金淋巴瘤(Hodgkinlymphoma，HL)、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinlymphoma，NHL)，鼻咽癌(nasoph－aryngeal carcinoma，NPC)，胃癌和移植后淋巴细胞增殖症(post-transplant lymphoproliferative disorder，PTLD)等。

EBV原发感染后建立终身潜伏感染。EBV潜伏感染可分为四种类型。在健康的EBV既往感染个体，EBV在记忆性B细胞潜伏，只表达EBERs，称为EBV潜伏感染0型，这些个体称为健康携带者。在EBV感染相关疾病中，EBV有三种潜伏感染类型。潜伏感染Ⅰ型，除EBERs外，EBV只表达EBNA1和BamHI A右侧片段(BARTs)，如Burkitt’s淋巴瘤；潜伏感染Ⅱ型，EBV表达EBNA1、LMP1、LMP2、BARTS和EBERs，如鼻咽癌、霍奇金淋巴瘤；潜伏感染Ⅲ型，EBV表达所有的潜伏感染基因，如免疫抑制病人的淋巴组织增生性疾病。

针对不同的EBV感染相关疾病，选择适当的临床标本和实验室检测方法，对于EBV感染相关疾病的诊断和治疗十分重要。为提高国内EBV感染相关疾病的诊治水平，特组织病毒学、临床和实验室诊断等方面的专家，参考国内外最新研究成果，制定此专家共识，以规范EBV实验室诊断方法的临床应用。

2.1　EBV特异性抗体检测

2.1.1　特异性抗体谱：

EBV编码多种结构抗原，包括病毒衣壳抗原(viral capsid antigen，VCA)、早期抗原(early antigen，EA)、膜抗原(membrane antigen，MA)、核抗原(nuclear antigen，NA)等。机体感染EBV后针对不同的抗原产生相应的抗体(图1)^[2]。原发性EBV感染过程中首先产生针对VCA的IgM和IgG(抗VCA-IgM/IgG)；在急性感染的后期，抗EA-IgG出现；在恢复期晚期，抗EBV核抗原(EBNA)IgG产生。目前主要用于实验室检测的EBV特异性抗体包括抗VCA-IgG、抗VCA-IgM和抗EBNA-IgG。另外，抗VCA-IgA和抗EA-IgA阳性提示持续性EBV抗原刺激，常用于CAEBV或EBV相关肿瘤的诊断和监测。

2.1.2　抗体亲和力：

机体在初次接触病原体时产生的特异性IgG抗体对相应抗原的亲和力随着免疫反应的进行会逐渐升高，抗VCA-IgG抗体亲和力的检测可帮助鉴别EBV原发感染和既往感染，其检测方法包括免疫荧光或酶联免疫方法。

有研究报道^[3]，所有原发性急性EBV感染患者在刚刚出现临床症状时，抗VCA-IgG抗体均为低亲和力；在出现临床症状10 d内，90%以上的患者可检测到抗VCA-IgG低亲和力抗体；在病程20～30 d后，50%患者的抗VCA-IgG抗体仍为低亲和力抗体；既往感染病例血清中抗VCA-IgG抗体则均为高亲和力抗体。因此，低亲和力抗VCA-IgG抗体提示原发性急性感染。联合抗EBNA-IgG阴性和低亲和力抗VCA-IgG抗体，其诊断原发性EBV感染的敏感性和特异性可达到100%^[4]。抗体亲和力检测也存在局限性：对于不同个体，抗体成熟率不同；新生儿及小婴儿由于母传抗体的存在也不适用抗体亲和力检测。

2.1.3　检测方法及标本类型：

EBV特异性抗体检测的适宜标本为血清或血浆，检测方法主要包括免疫荧光法、免疫酶法、酶联免疫法、化学发光法、免疫印迹法等，其中酶联免疫法和化学发光法由于可以实现自动化检测，在临床应用较为广泛。

2.1.4　临床意义：

对于免疫功能正常的患者，一般情况下结合抗VCA-IgM、抗VCA-IgG和抗EBNA-IgG3个抗体的检测结果可以区分EBV原发感染和既往感染：抗VCA-IgG、抗VCA-IgM抗体阳性而抗EBNA-IgG阴性提示EBV原发感染，抗VCA-IgM阴性而抗VCA-IgG和抗EBNA-IgG阳性则是典型的EBV既往感染抗体类型(详见表2)^[5]。但有的病例抗VCA-IgM产生延迟，有的则缺失或长时间存在，并且EBV再激活时也可能出现抗VCA-IgM，抗VCA-IgM有时也会出现假阳性(如人巨细胞病毒感染时)，4岁以下儿童抗VCA-IgM水平低且持续时间短；抗EA-IgG在原发感染后期出现，少数病例可能在原发感染后长时间检出，并且EBV再激活时也可能出现抗EA-IgG；约5%的健康携带者缺失抗EBNA-IgG抗体，另外免疫抑制患者抗EBNA-IgG抗体也可能会丢失或水平很低；有的既往感染过EBV的患者抗VCA-IgG可能为阴性^[6,7]；鼻咽癌患者VCA-IgA和EA-IgA抗体滴度明显高于健康携带者。因此EBV感染后血清学反应复杂多样，有时给抗体结果解释尤其是单份血清的抗体结果解释带来困难。

根据EBV感染过程中抗体产生的不同动力学特点，同时检测患者血清中几种EBV抗体(抗VCA-IgM/IgG、抗EA-IgG及抗EBNA-IgG)和抗VCA-IgG亲和力可以提高诊断原发性EBV感染的敏感性和特异性^[8]，帮助判断原发性EBV感染、既往EBV感染或既往EBV感染再激活。

2.2　嗜异凝集抗体检测

嗜异凝集抗体为IgM抗体，在病程第1～2周出现，在病程5周内达到高峰，随后迅速下降，但是少数患者可以持续约6～12个月。在成人和青少年，85%～90%原发性EBV感染者会出现嗜异凝集抗体；但是大约只有50%的2～5岁儿童原发性EBV感染后此抗体为阳性，而小于2岁的儿童原发性EBV感染后此抗体的阳性率仅10%～30% ^[5]。

2.2.1　检测方法及标本类型：

采用试管法或血凝反应板法，标本类型为血清或血浆。

2.2.2　临床意义：

此抗体检测缺乏特异性，其他急性感染如原发性巨细胞病毒感染、自身免疫性疾病或肿瘤等也可能呈阳性反应^[9,10]。国内儿童IM的发病高峰年龄为4～6岁，因此该抗体检测在国内儿童IM的诊断中价值不大^[11]。因此，不推荐用于国内儿童EBV原发性感染所致IM的诊断。

2.3　EBV核酸载量检测

EBV-DNA载量测定(最常用的标本是外周血)已经被广泛应用于EBV相关疾病的诊断、病情监测、治疗效果评估和预后判断等。无菌体液(如肺泡灌洗液、脑脊液等)样本也可检测EBV-DNA，用于EBV相关疾病的辅助诊断。