EB病毒感染实验室诊断及临床应用专家共识解读（下）

2.4.1　检测方法及标本类型：

采用原位杂交法，标本类型为病理组织或细胞涂片。

2.4.2　临床意义：

原位杂交检测EBERs能够定位EBV感染的细胞类型，是明确肿瘤与EBV相关的金标准。各种实验室诊断方法采用的标本类型、检测方法以及特点详见。

EBV感染与多种临床疾病相关，熟悉不同EBV感染实验室诊断方法的优缺点，针对不同的EBV感染相关疾病，选择适当的临床样本和实验室检测方法，对于EBV相关疾病的诊断和治疗十分重要。

3.1　原发性EBV感染相关疾病

3.1.1　IM：

IM是原发性EBV感染引起的良性自限性疾病，其典型临床表现为发热、咽峡炎和颈淋巴结肿大的"三联征"，外周血淋巴细胞显著增多并出现异型淋巴细胞，可合并肝脾肿大和肝功能异常。多数预后良好，少数可出现严重并发症，如噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH)。

3.1.1.1　EBV特异性抗体检测

对于免疫功能正常的患者，EBV特异性抗体检测仍然是诊断IM的金标准。但是，如前所述，EBV感染后的血清学反应复杂多样，根据EBV感染过程中不同抗体产生的动力学特点，同时检测患者血清中3种EBV特异性抗体(抗VCA-IgM/IgG、抗EBNA-IgG)，并结合抗VCA-IgG亲和力检测，可提高原发性EBV感染诊断的敏感性。IM的EBV特异性抗体检测指标包括(1)抗VCA-IgM和抗VCA-IgG阳性，且抗EBNA-IgG阴性；或(2)抗VCA-IgM阴性，但抗VCA-IgG阳性，且为低亲和力抗体。

3.1.1.2　EBV核酸载量检测

对诊断IM的阴性预测值较低，不必常规进行检测，仅对EBV抗体检测结果难以解释的病例可能有所帮助^[12]。使用血清或血浆标本进行EBV-DNA检测。因IM患者PBMC中EBV-DNA阳性可持续6个月以上，需要1年或更长时间达到EBV健康携带者的全血EBV-DNA水平(1-30拷贝EBV-DNA/106 PBMC)，因此，在IM的诊治中需使用血清或血浆标本进行EBV-DNA载量检测，不宜使用全血和PBMC样本。

3.1.2　免疫缺陷患者EBV原发性感染(X连锁淋巴增生症，移植患者等)

3.1.2.1　EBV特异性抗体检测

免疫缺陷患者(如移植患者接受免疫抑制剂治疗)，体液免疫反应不足，并且由于接受输血或者输注免疫球蛋白的治疗也会干扰血清抗体的检测结果，因此免疫缺陷患者发生原发EBV感染时，血清特异性抗体检测的价值有限。

3.1.2.2　EBV核酸载量检测

由于免疫缺陷患者抗体反应往往不足，核酸载量检测有助于原发EBV感染的诊断，推荐使用全血或PBMC标本进行EBV-DNA动态检测。对于X连锁淋巴增古症患者，至少每6个月监测1次EBV-DNA；对于移植患者，移植后每周监测EBV-DNA至少3个月(可长至6个月)，以后每月监测EBV-DNA到移植后1年。

3.1.3　其他EBV原发性感染相关疾病(EBV脑膜炎或脑炎、心肌炎、间质性肺炎等)：

EBV感染几乎可以累及各个脏器，有些患者EBV原发感染临床表现不符合典型IM的临床特征，而以某一脏器受累为主，如间质性肺炎、心肌炎及脑炎等。

3.1.3.1　EBV特异性抗体检测

血清或血浆中的EBV特异性抗体检测结果符合原发性EBV感染。

3.1.3.2　EBV核酸载量检测

脑脊液标本EBV-DNA检测阳性有助于EBV感染脑膜炎或脑炎的诊断；肺泡灌洗液标本EBV-DNA检测阳性有助于EBV感染间质性肺炎的诊断。

3.1.3.3　EBERs原位杂交

病理组织样本(如心肌活检组织等)中EBERs原位杂交阳性结果，是明确本次疾病与EBV相关的最直接的证据。

3.2　持续性或再激活EBV感染相关疾病

3.2.1　CAEBV：

CAEBV是一种严重的EBV感染疾病，其临床表现是IM样症状持续或反复发作，并逐渐出现多种器官的慢性损害，如持续性肝功能损害、多发性淋巴结病、肝脾大、噬血细胞综合征、视网膜炎、间质性肺炎、牛痘样水疱病及蚊虫叮咬过敏等。

3.2.1.1　EBV特异性抗体检测

异常的EBV抗体水平是CAEBV的诊断标准之一。2005年Okano等^[13]提出的CAEBV诊断指南：EBV特异性抗体指标需要满足抗VCA-IgG≥1∶640和抗EA-IgG≥1∶160，VCA-IgA和(或)EA-IgA也常阳性。但上述EBV抗体滴度的检测方法均为免疫荧光方法，对于常规临床实验室检测有一定困难。目前尚无免疫酶学方法对应的界定阈值。

3.2.1.2　EBV核酸载量检测

CAEBV患者外周血中EBV载量较健康携带者明显升高。CAEBV患者血清或血浆中EBV-DNA阳性，或外周血PBMC中EBV-DNA高于102.5拷贝/μg DNA。Kimura等^[14]对30名CAEBV患者的研究发现，所有CAEBV患者PBMC中EBV-DNA均为阳性，且高于102.5拷贝/μg DNA，尽管多数CAEBV患者PBMC中的EBV-DNA与血浆中EBV-DNA有较好的相关性，但是有6名患者血浆中EBV-DNA检测为阴性。因此对于临床怀疑CAEBV的患者，若血清或血浆标本EBV-DNA检测为阴性，可以进一步采用外周血PBMC检测EBV核酸载量，且CAEBV通常为高载量。

3.2.1.3　EBERs原位杂交

CAEBV患者受累器官的活检组织标本和外周血中EBV感染的B/T/NK等细胞中EBERs阳性。