【冯仁丰】系列讲座 34 定量检验线性性能评价和验证2 介绍CLSI EP6-P文件 ...

病人结果检测范围，也即方法或检测系统的线性范围。

评价实验要求

1、进行检测范围实验的样品必须和真实样品尽可能相似，也即要和真实样品具相同的基质状态。

2、最好有5个或以上的系列浓度的实验样品，浓度范围遍布整个检测范围。最高浓度的样品应达到检测范围的上限。各实验样品内含分析物浓度间呈等比例关系，不要呈倍比关系。

3、加入的“浓储存液”体积不超过十分之一。

  5L、4L＋1H、3L+2H、2L+3H、1L＋4H、5H

4. 每个样品至少作4次重复测定。

统计处理

1、若有5个浓度，每个浓度进行4次测定，则将所有20对（x,y）结果点于坐标纸上，观察有无线性表现。有线性的进行直线回归处理。

2、不取均值，直接对20对结果作回归处理。

3、直线回归式：

  理想状态：b＝1，a＝0；

问题：绘制的回归线是作直线回归处理，所以画出来的线是直线。但是，实验结果是否能被确认，各个浓度间确实具有良好的线性关系，这才是最真实的。EP6-P就是用于判断线性的文件。

图1：线性评价中的直线回归

EP6-P文件基本原理

一、统计上评价线性的意义

EP6-P对线性数据处理的依据：线性数据的直线回归表现。

图2：线性评价中回归直线的意义 

图3：线性评价的各组数据重复检测值的方差

进行回归处理的前提：

对实验数据的可靠性进行核查。

第一，各实验样品的重复数据中有无离群点；

第二，各实验样品重复数据组间的方差大小是否比较一致，即：是否某组的方差较其他组的方差大得多；若是这样，那么非线性不一定是真实的，是实验操作不精密度差所致。只有这两方面都符合要求，才可进行线性的统计检验。

线性实验的总方差

线性实验的总方差反映了实验的总不精密度：

注：按照EP6-P线性评价实验方案，共有5个样品（i=5）；每个样品进行了4次重复检测，j=4。

图5：线性评价实验数据点的方差

由图说明，回归配合后引入的误差估计量,基本上就是由各组点的不精密度量总和ΣSS组成。

在EP6-P线性评价中，令这二者的差为“线性失拟误差（Lack of Fit，LOF）”。

（注：式中TE即ΣSS）

当实验结果呈线性表现时，LOF很小，它与自由度相除后，与ΣSS被自由度相除后的比值（F）将小于F0.05；由此，EP6-P文件判断实验结果为线性。

EP6-P对非线性数据处理的依据

非线性数据的直线回归表现：

图7：线性评价非线性的表现

图8：线性评价非线性的分析

非线性时的表现

上图说明：实验中各组数据的总不精密度依然与前线性表现时一致。

但是，非线性表现的各组数据点，仍然作直线回归处理时，为了顾及所有点的回归线，大大增加了所有各组数据点对于线的离散程度。

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