【冯仁丰】系列讲座 9 临床实验室检测结果互换性 2

临床实验室检测结果互换性

冯仁丰

三、缺乏互换性的经典示例-SRM 2921肌钙蛋白I参考物质

2006年AACC的二月期刊上，Bunk和Welch报告，一个新批准的人肌钙蛋白I参考物质的特性。报告提供了在该物质使用的肌钙蛋白复合物的亚基组成的特性，对肌钙蛋白I成分设定的质量值，可溯源至SI制单位。该参考物质声明的预期使用，是为了校准临床肌钙蛋白I的检测。这个参考物质与天然临床样品的互换性，还没有被确认，但正在进行中。

当互换性数据可用了，该参考物质将合规于ISO 15194。但是，在报告（NIST SRM 2921）中叙述的该参考物质，在缺少互换性确认数据下，已经被市售可用了。

肌钙蛋白I（cTnI），是早期诊断心肌梗死的重要指标。由于罗氏公司最早发现了肌钙蛋白T的使用价值，申请专利得到长期保护，使得其他公司只能去发展肌钙蛋白I。2006年的调查说明，各个公司对相同病人样品的检测结果差异达40倍以上。因此，迫切希望有一个国际公认的肌钙蛋白参考物质，以此改善肌钙蛋白I检测的一致性。在IFCC和AACC共同参与下，由美国标准和检测研究院（NIST），开展了肌钙蛋白参考物质的研究。在人心肌中提取了纯肌钙蛋白（cRMCIT），也以基因生物重组技术得到了另一个肌钙蛋白。但经实验后，确定采用人心肌纯化的cRMCIT为最后候选的肌钙蛋白参考物质。按照参考物质的要求，工作组也对该物质的互换性进行了实验观察。收集了六个cTnI阳性的混合血清、以及阴性混合血清发送给15个cTnI参加的厂商检测。由它们对这些样品的检测结果。按照互换性评估的做法，评估候选参考物质物质的互换性。

心肌肌钙蛋白I（cTnI）检测在检测方法间有20~40倍的差异，需要较好的标准化和一致性。为了这个目标，AACC cTnI标准化委员会与NIST合作，在早期选择2个候选的参考物质（cRMs）。

两个肌钙蛋白I的cRM，一个是人心组织的肌钙蛋白的C-troponin和I-troponin（CIT）复合物；一个是重组技术得到的CIT复合物，提供给NIST对它们的组成和纯度进行评估。注:已经确认人心组织纯化的CIT为认可的参考物质。因此，以后的示例中仅以CIT为例。这些cRM和六个cTnI阳性的血清发送给15个cTnI厂商检测。由它们对这些样品的检测结果。按照互换性评估的做法，评估候选参考物质物质的互换性。

由于肌钙蛋白I没有参考方法，进行互换性评估时，只能以15个厂商的肌钙蛋白I检测方法对人混合血清的检测结果，进行两两组合进行方法学比较。各组对病人样品检测结果的方法学比较，以Passing-Bablok回归方法处理，确定各组比较的数学关系。然后将cRM在各组中的检测结果对，与回归关系比较，了解cRM检测结果对于病人样品结果趋势的差异。以此了解cRM对于病人样品检测结果间的互换性。

cTnI方法间的互换性比例，展示CIT cRM（人心肌纯化物）的互换性为45%；展示具有互换性的方法的比例，在使用共有校准品下对于cTnI检测方法太低。但是，使用混合血清的简单做法可以改善现场cTnI方法一致性超过5倍。CIT cRM被AACC cTnI标准化委员会选定为RM；一个新批号被分类为cTnI批准的参考物质，即NIST的SRM 2921。

当某物质准备用于常规方法的同一校准品时，互换性是一个物质的必须特性。确定一个物质的互换性很复杂，尤其在没有参考方法可以予以直接评价该物质时，但可以通过对较多数量的混合血清，在可用的检测程序间去比较该物质的表现，进行评估。在cTnI情况下，非均相性和由疾病确定的被测量，限制了对使用不同结合特性的、和不完善特异性的不同抗体的不同检测方法，难以形成一个普遍的可互换的校准品。所以，不惊讶的是，各个方法对于cRM响应间的真实不一致性。

四、肌钙蛋白I（cTnI）标准化的过程

由于心肌梗死诊断的紧要和迫切性，使用肌钙蛋白对疑似心肌梗死病人的检测时当今的主要项目。因为cTnT被Roche（原Bergmeyer）公司专利垄断，其他公司只能开发cTnI项目。

各个公司的cTnI产品对病人样品检测结果间，结果无可比性，差异可达百倍！一直认为，国际上缺少肌钙蛋白参考物质，才是可比性差的主要关键。

2006~2012年cTnI标准化的认识：

心肌肌钙蛋白I的标准化趋势－检测部分Ⅱ：评估候选参考物质的互换性和对心肌肌钙蛋白I检测的协同作用。作者：RH Christenson et al.方法：两个肌钙蛋白cRMs，一个为来自人心组织的人cTnC、cTnT和cTnC复合物（CIT），另一个CIT来自重组技术，提供给NIST对其组成和纯度作评估和对cTnI值的设定（CI）。这些cRMs和6个cTnI阳性人混合血清发送给15个cTnI厂商。在每个厂商的检测方法和每个其他的14个方法间确定cRM制品的数量关系，以检查物质的互换性。这些关系与采用人混合血清的数量关系作比较。

结果：CIT和CI的cRM的特性，说明这些物质具有特定的组成。显示对于CIT的cRM具有互换性的cTnI方法的比例为45％；对于CI的cRM的协同比例为39％。现场方法的检测cTnI间的CV变异范围为：82％～97％，中位数为88％。协同后，混合血清的cTnI方法变异CV减少为9.0％～23％，中位数为15.5％。

 结论：用作通用校准品，现有cTnI方法显示互换性的方法比例太少。但是，使用混合血清的简单做法，可改善现有方法的协同5倍以上。

肌钙蛋白I检测的标准化：一个更新

Standardization of troponin I measurements：an update

作者：Mauro Panteghini (Cebtre for Metrological Traceability in Laboratory Medicine (CIRME), University of Milan, Milano, Italy)等

在血液中，存在的cTnI是一个具有不同分子类型的非均相混合物。因为其非均相性引出的分析问题，可能在识别混合物的所有组分中共有的、分子的一致的不变部分所克服。用于形成cTnI检测的抗体，应被选择地识别这个不变异部分内的决定簇，才可导致免疫检测反应性均一性随之而来的增加。这也应与使用参考物质联系起来，该物质代表了组织释放到血液中的天然的和主要的抗原，即肌钙蛋白复合物。虽然，现在已有一级cTnI参考物质可用，研究说明使用该物质的重新校准后，cTnI的测定依然不能一致。

SRM 2921中的cTnI的观察到的分子质量分布，说明了非均相的真实程度。组分的图谱和特别是组分间质量的差异显示了转换后的修饰，如：C-端的磷酸化、被切断。转换后的修饰类型已被报告。SRM 2921看来与这些种类的分布有些不同；SRM 2921似乎含有较多的C-端切断的物质。另外，分子量23918的种类（试探性被设定为非磷酸化的、完整的cTnI）没有被观察到。