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【冯仁丰】系列讲座 9 临床实验室检测结果互换性 2

归去来兮 2022-3-23 236人围观 技术

临床实验室检测结果互换性

冯仁丰

三、缺乏互换性的经典示例-SRM 2921肌钙蛋白I参考物质


2006年AACC的二月期刊上,Bunk和Welch报告,一个新批准的人肌钙蛋白I参考物质的特性。报告提供了在该物质使用的肌钙蛋白复合物的亚基组成的特性,对肌钙蛋白I成分设定的质量值,可溯源至SI制单位。该参考物质声明的预期使用,是为了校准临床肌钙蛋白I的检测。这个参考物质与天然临床样品的互换性,还没有被确认,但正在进行中。


当互换性数据可用了,该参考物质将合规于ISO 15194。但是,在报告(NIST SRM 2921)中叙述的该参考物质,在缺少互换性确认数据下,已经被市售可用了。


肌钙蛋白I(cTnI),是早期诊断心肌梗死的重要指标。由于罗氏公司最早发现了肌钙蛋白T的使用价值,申请专利得到长期保护,使得其他公司只能去发展肌钙蛋白I。2006年的调查说明,各个公司对相同病人样品的检测结果差异达40倍以上。因此,迫切希望有一个国际公认的肌钙蛋白参考物质,以此改善肌钙蛋白I检测的一致性。在IFCC和AACC共同参与下,由美国标准和检测研究院(NIST),开展了肌钙蛋白参考物质的研究。在人心肌中提取了纯肌钙蛋白(cRMCIT),也以基因生物重组技术得到了另一个肌钙蛋白。但经实验后,确定采用人心肌纯化的cRMCIT为最后候选的肌钙蛋白参考物质。按照参考物质的要求,工作组也对该物质的互换性进行了实验观察。收集了六个cTnI阳性的混合血清、以及阴性混合血清发送给15个cTnI参加的厂商检测。由它们对这些样品的检测结果。按照互换性评估的做法,评估候选参考物质物质的互换性。

心肌肌钙蛋白I(cTnI)检测在检测方法间有20~40倍的差异,需要较好的标准化和一致性。为了这个目标,AACC cTnI标准化委员会与NIST合作,在早期选择2个候选的参考物质(cRMs)。


两个肌钙蛋白I的cRM,一个是人心组织的肌钙蛋白的C-troponin和I-troponin(CIT)复合物;一个是重组技术得到的CIT复合物,提供给NIST对它们的组成和纯度进行评估。注:已经确认人心组织纯化的CIT为认可的参考物质。因此,以后的示例中仅以CIT为例。这些cRM和六个cTnI阳性的血清发送给15个cTnI厂商检测。由它们对这些样品的检测结果。按照互换性评估的做法,评估候选参考物质物质的互换性。


由于肌钙蛋白I没有参考方法,进行互换性评估时,只能以15个厂商的肌钙蛋白I检测方法对人混合血清的检测结果,进行两两组合进行方法学比较。各组对病人样品检测结果的方法学比较,以Passing-Bablok回归方法处理,确定各组比较的数学关系。然后将cRM在各组中的检测结果对,与回归关系比较,了解cRM检测结果对于病人样品结果趋势的差异。以此了解cRM对于病人样品检测结果间的互换性。


cTnI方法间的互换性比例,展示CIT cRM(人心肌纯化物)的互换性为45%;展示具有互换性的方法的比例,在使用共有校准品下对于cTnI检测方法太低。但是,使用混合血清的简单做法可以改善现场cTnI方法一致性超过5倍。CIT cRM被AACC cTnI标准化委员会选定为RM;一个新批号被分类为cTnI批准的参考物质,即NIST的SRM 2921。


当某物质准备用于常规方法的同一校准品时,互换性是一个物质的必须特性。确定一个物质的互换性很复杂,尤其在没有参考方法可以予以直接评价该物质时,但可以通过对较多数量的混合血清,在可用的检测程序间去比较该物质的表现,进行评估。在cTnI情况下,非均相性和由疾病确定的被测量,限制了对使用不同结合特性的、和不完善特异性的不同抗体的不同检测方法,难以形成一个普遍的可互换的校准品。所以,不惊讶的是,各个方法对于cRM响应间的真实不一致性。


四、肌钙蛋白I(cTnI)标准化的过程


由于心肌梗死诊断的紧要和迫切性,使用肌钙蛋白对疑似心肌梗死病人的检测时当今的主要项目。因为cTnT被Roche(原Bergmeyer)公司专利垄断,其他公司只能开发cTnI项目。


各个公司的cTnI产品对病人样品检测结果间,结果无可比性,差异可达百倍!一直认为,国际上缺少肌钙蛋白参考物质,才是可比性差的主要关键。

2006~2012年cTnI标准化的认识:

心肌肌钙蛋白I的标准化趋势-检测部分Ⅱ:评估候选参考物质的互换性和对心肌肌钙蛋白I检测的协同作用。作者:RH Christenson et al.方法:两个肌钙蛋白cRMs,一个为来自人心组织的人cTnC、cTnT和cTnC复合物(CIT),另一个CIT来自重组技术,提供给NIST对其组成和纯度作评估和对cTnI值的设定(CI)。这些cRMs和6个cTnI阳性人混合血清发送给15个cTnI厂商。在每个厂商的检测方法和每个其他的14个方法间确定cRM制品的数量关系,以检查物质的互换性。这些关系与采用人混合血清的数量关系作比较。


结果:CIT和CI的cRM的特性,说明这些物质具有特定的组成。显示对于CIT的cRM具有互换性的cTnI方法的比例为45%;对于CI的cRM的协同比例为39%。现场方法的检测cTnI间的CV变异范围为:82%~97%,中位数为88%。协同后,混合血清的cTnI方法变异CV减少为9.0%~23%,中位数为15.5%。


 结论:用作通用校准品,现有cTnI方法显示互换性的方法比例太少。但是,使用混合血清的简单做法,可改善现有方法的协同5倍以上。


肌钙蛋白I检测的标准化:一个更新

Standardization of troponin I measurements:an update

作者:Mauro Panteghini (Cebtre for Metrological Traceability in Laboratory Medicine (CIRME), University of Milan, Milano, Italy)等


在血液中,存在的cTnI是一个具有不同分子类型的非均相混合物。因为其非均相性引出的分析问题,可能在识别混合物的所有组分中共有的、分子的一致的不变部分所克服。用于形成cTnI检测的抗体,应被选择地识别这个不变异部分内的决定簇,才可导致免疫检测反应性均一性随之而来的增加。这也应与使用参考物质联系起来,该物质代表了组织释放到血液中的天然的和主要的抗原,即肌钙蛋白复合物。虽然,现在已有一级cTnI参考物质可用,研究说明使用该物质的重新校准后,cTnI的测定依然不能一致。


SRM 2921中的cTnI的观察到的分子质量分布,说明了非均相的真实程度。组分的图谱和特别是组分间质量的差异显示了转换后的修饰,如:C-端的磷酸化、被切断。转换后的修饰类型已被报告。SRM 2921看来与这些种类的分布有些不同;SRM 2921似乎含有较多的C-端切断的物质。另外,分子量23918的种类(试探性被设定为非磷酸化的、完整的cTnI)没有被观察到。

TO BE CONTINUED


来自: 冯仁丰
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