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定性检测用体外诊断试剂的企业内部参考品的设置(二)

笔者苏洛 2018-11-15 11:18 AM 6141人围观 技术


    企业内部参考品对于生产企业来说至关重要,其是产品原材料选择、制备、鉴定以及确定原材料质量标准,产品生产工艺确定,反应体系组成、反应条件等的最重要的确定标准和依据。


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精密度参考品

精密度参考品可反映产品检测的重复性以及重复检测的稳定性。一般精密度参考品应包括至少两种样本,低滴度阳性样本与高值阴性样本。

精密度参考品应是包括被测物的主要型别的不同样本。且不同型别样本应是低滴度阳性样本。精密度参考品也应包括高值阴性样本,该样本可反映产品检测的稳定性。精密度参考品的检测次数应在10次左右,检测次数过多或过少均无法客观反映产品检测的重复性。

精密度的计算:在定性检测的体外诊断试剂产品中,如可通过阅读仪或其它读取设备读取光强度或其它信号来判断实验结果的,例如以酶联免疫法原理检测的试剂,应采用检测的OD值计算藿复检测的标准差、均值、变异系数(CV)来表示产品检测的重复性,不能只以目测颜色深浅来对检测的承复性进行评价。重复性检测结果的CV值一般情况下应<10%,有些特殊方法的检测试剂由于方法学的原因可以适当放宽重复性要求。

对于一些可能产生HOOK效应的检测方法。如酶联免疫分析法、胶体金法,应制备强阳性精密度参考品进行精密度的检测,以验证产品避免产生HOOK效应的能力。HOOK效应是一些免疫检测方法无法避免的方法缺陷,企业在研发和生产产品时应对产品的HOOK效应进行详细的研究,并给出产品检测不会产生HOOK效应的被测物最大浓度,企业应该根据此浓度设置强阳性参考品,以验证同一批产品或不同批次产品之间是否存在差异,是否会产生HOOK效应。


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最低检出限参考品

最低检出限参考品是评价产品检测能力的重要工具,对于定性产品其是评价产品检测下限的依据,因此其设计的合理性非常重要。如被测物包括多个型别和亚型,最低检出限参考品至少选择三个主要型别或亚型进行设置。

选择不同型别的强阳性样本作为基础样本,使用健康 人的阴性血清对强阳性样本进行倍比稀释得到一系列稀释度的样本,该稀释过程必须保证样本的基质保持不变。使用待评价产品对不同稀释度的参考品进行检测,每个稀释度参考品至少检测三次,直至检测为阴性结果为止。

检测为阳性的最高稀释度参考品为最低检出限参考品。最低检出限参考品的批间一致性是评价产品是否能保持批间一致性的重要指标。因此,必须对最低检出限参考品进行被测物的定量或半定量。

在技术审评过程中经常发现有些申报企业在设置该参考品时只是选择一个临床的强阳性样本,然后进行倍比稀释,对系列稀释的参考品进行检测,直至检测到结果为阴性的参考品,并将上一个稀释度参考品设置为最低检出限的评价标准,或将该参考品的稀释度设定为评价标准。但是其并不能清楚的确定参考品中的被测物的具体浓度。因此,这种设置并不能有效的评价产品的最低检出限,也不能使不同批次的参考品保持一致性。所以,应采用可能的方法对该参考品进行被测物的定量或半定量,以期给出最低检出限参考品中的被测物的具体量值。

最低检出限参考品可以采用国家药监局已经批准上市的产品、质量较好的同类定量试剂对参考品进行定值,如该检测项目存在国家或国际的定量标准品,则应对该参考品进行量值的溯源。如该检测项目没有定量检测试剂可以进行参考。则可以采用其它方法或金标准的方法对参考品进行定量或半定量。

如果检测项目已经有国家参考品或者国际参考品,企业内部参考品的设置应尽可能的溯源至国家参考品或国际参考品,除了设置国家参考品或困际参考品设定的项目外,企业应主动设置更多的参考品以充分评价产品的性能,保证生产的产品可以满足临床使用的安全性和有效性。

来源: 医疗装备杂志
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