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免疫定性项目检测限验证该如何去做?

笔者苏洛 2018-9-27 01:21 PM 2509人围观 技术

【前言】

随着检验技术的飞速发展对实验室质量管理要求也更加严格越来越多的实验室进行了国际标准化组织(简称ISO)15189医学实验室认可,根据认可要求中CNAS-CL39:2012第5.5.1.1的要求,对于定性检测项目的性能验证内容,应对试剂盒说明书上明确标示的性能参数进行验证,至少应包括检测限(limit of detection),本文就如何进行定性项目检测限的验证进行相关说明[1]

我们先来回顾一下检测限的概念:它是指检测方法可检测出的最低被测量浓度,即检测低限(lower limit of detection)或最小检出浓度(minimumdetectable concentration),也称为分析灵敏度,是定性检测项目重要的性能指标。学习检测限我们不得不提到C5及C95,C5是检测某一浓度的分析物20次时,将产生5%的阳性结果,即1次阳性结果和19次阴性结果,此时的浓度为C5浓度;C95是检测某一浓度的分析物20次时,将产生95%的阳性结果,即19次阳性结果1次阴性结果,此时的浓度为C95浓度。分析物浓度位于C5-C95区间之外(小于C5或大于C95)时,候选方法对同一样本的重复性检测将得到相同结果。因此C95代表了该试剂可以测出的最低被测量浓度, 即最低检测限[3]


目前,国内没有专门针对定性项目的检测限检测标准,可参考EP17文件 和《临床定性免疫检验重要常规项目分析质量要求》。针对感染性疾病其抗原和抗体的检测中,在特异性稳定的的情况下,最低检测限越低越好;针对有无国际标准物质,具体分为两种操作方案:(1)有参考品的操作方案:评估试剂检测限所使用的样本,如检测项目有国家参考品,则可使用国家参考品或用国家参考品标化的参考品进行检测,如没有国家参考品,则使用可以溯源或量化的样本,如国际标准物质或与可溯源的样本,是更有意义的。如果有上述标本则可以通过稀释检测得到相应的浓度可估算出C5浓度和C95浓度,即进行20次检测如果20次有19次结果为阴性,1次结果为阳性,此检测物浓度为C5;如果19次结果为阳性,1次结果为阴性,此浓度为C95浓度,C95浓度代表即为最低检测限[2](2)无参考品具体操作方案:无国家参考品实际情况下,有些定性项目不能提供可溯源性物质,建议降低标准,采用有已知恒定值的校准品或质控品[2]。操作方法:将标准物质或试剂盒中提供的阳性校准品进行梯度稀释;准备临界值-20% 浓度 和+20% 浓度的样品;对临界值 ±20% 浓度的样品分别测定20次;记录阴性和阳性结果数,要求 -20% 浓度样品产生的阴性结果达到 95%以上,+20% 浓度样品产生的阳性结果达到95%以上,才符合要求。如图1、图2。

图1  C5浓度样品20次结果

图2  C95浓度样品20次结果

【总结

临床免疫学检验领域认可的目的就是保证检验结果的准确性,建议临床实验室根据本身实际情况,进行最低检测限的验证。在此过程中,发现问题,及时改进,建立有效质量管理体系,达到实验室认可的终极目标。


【参考文献】

[1] 临床定性免疫检验重要常规项目分析质量要求.WS/T 494—2017.

[2]ISO15189医学实验室认可在临床免疫检验评审中常见不符合项及纠正措施 中华临床实验室管理电子杂志 2017,11:5-4.

[3]中国合格评定国家认可委员会. CNAS-CL02:2012医学实验室质量和能力认可准则. 2012:1-54.

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来源: 检验频道
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