【新型冠状病毒】武汉地区8 274例受检者新型冠状病毒核酸检测及合并感染结果分析 ...

对象与方法

一、对象

纳入COVID-19暴发初期即2020年1月20日至2月9日于武汉大学人民医院进行2019-nCoV核酸检测的所有受检者共计8 274例，男3 634例，女4 640例。其中新生儿25例，儿童344例，成人7 905例。年龄从1天到105岁，中位数46岁。本研究通过了武汉大学人民医院临床研究伦理委员会的批准（WDRY2020-K061），所有受试者或监护人均签署知情同意书。受检者的2019-nCoV开放读码框1ab（open reading frame,ORF1ab）和核壳蛋白（nucleoprotein，N）基因同时阳性，归为阳性组；受检者以上两种靶标同时阴性归为阴性组；只有一个靶标阳性而被归为可疑组。

二、方法

1. 标本的收集：受检者标本由专业医护人员采集，及时转运至分子病原实验室检测。标本检测前置于56 ℃灭活45 min。同时收集了部分非呼吸道标本进行2019-nCoV核酸检测。标本类型包括呼吸道标本（鼻咽、口咽、痰和肺泡灌洗液）8 274份和非呼吸道标本（尿、粪便、肛拭子、血液和结膜囊拭子）175份；呼吸道标本为临床常规检测标本，非呼吸道标本为尝试性检测标本，不作主要临床诊断依据。

2. 仪器：PCR仪为美国Thermo公司的Veriti梯度PCR仪、Quantstudio Dx及7500型荧光PCR仪，毛细管电泳使用美国Thermo公司的3500Dx测序仪。

3. 试剂及判断标准：2019-nCoV核酸检测试剂盒分别为上海捷诺公司、上海伯杰公司、江苏硕世公司、上海辉睿公司和湖南圣湘公司的新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒，以2019-nCoV核壳蛋白N基因、开放读码框ORF1ab为检测靶标。最初使用上海捷诺公司的试剂盒，用其核酸阳性再去筛选其他四种试剂盒；选择阳性率高，且单一基因阳性少的试剂盒作为常规检测试剂盒。13项呼吸道病原体检测由宁波海尔施基因公司提供。2019-nCoV核酸检测结果确认为阳性需满足同一份标本中ORF1ab及N基因双靶标检测结果同时阳性，或两种标本同时出现单靶标阳性，或同类型标本两次单靶标阳性的检测结果，该患者被定义为实验室确认（laboratory-confirmed）^[9]。

4. 2019-nCoV核酸提取及RT-PCR检测：灭活后的样本取300 µl，使用半自动核酸提取仪及配套试剂盒提取核酸，核酸检测采用RT-PCR法（一步法）检测，检测结果判读以各厂家说明书建议为准，对可疑结果应通知临床重新采样复查。

5.非2019-nCoV呼吸道病原体检测：13项呼吸道病原体检测项目可用于筛查腺病毒（B亚群、C亚群、E亚群）、博卡病毒、甲型流感病毒（INFA、H7N9、H1N1、H3N2、H5N2）、乙型流感病毒（V系、Y系）、冠状病毒（229E、OC43、NL63、HKU1）、偏肺病毒（A1、A2、B1、B2）、副流感病毒（1型、2型、3型、4型）、呼吸道合胞病毒（A型、B型）、鼻病毒（A、B、C）、肺炎支原体、沙眼衣原体、肺炎衣原体等13种常见呼吸道病原。核酸提取后对病原核酸进行多重PCR扩增，扩增完成后使用测序仪进行毛细管电泳分离不同病原核酸片段，结果判读遵循生产商使用说明。

三、统计学方法

采用SPSS 19.0软件进行数据处理。非正态分布的连续变量以中位数（四分位数）表示，分类变量以百分数表示，P<0.05为差异有统计学意义。

结果

一、8 274例受检者年龄和性别特征

1. 在8 274例2019-nCoV核酸受检者中，年龄经Shapiro-Wilk检验为非正态分布，中老年者居多。2019-nCoV核酸检测结果阳性为2 745例（33.17%），阴性为5 277例（63.77%），可疑为252例（3.05%）。2019-nCoV核酸阳性年龄中位数为56岁，可疑组年龄中位数为52岁，阴性年龄中位数为40岁，其前二组人群高于后一组人群（t=-27.569, t=-6.774, P均<0.001）。男性阳性率35.99%，高于女性阳性率30.97%，差异具有统计学意义（χ²=234.803，P<0.001）。结果见表1。

二、2019-nCoV合并其他呼吸道病原体感染情况分析

对316例受检者同时检测了13种其他常见呼吸道病原体核酸。2019-nCoV核酸阳性的受检者104例，2019-nCoV核酸阴性的受检者212例。在2019-nCoV核酸阳性的受检者中，13种其他常见呼吸道病原体合并感染者占5.77%。2019-nCoV核酸阳性的受检者感染其他呼吸道病原体比例低于2019-nCoV核酸阴性者，差异有统计学意义（5.77% >18.4%, χ²=24.105, P<0.001），结果见表2。

三、不同类型样本2019-nCoV核酸检出情况

对多种呼吸道标本和非呼吸道的标本进行2019-nCoV核酸的检测，结果发现，8 274份呼吸道标本（鼻咽、口咽、痰和肺泡灌洗液）和175份非呼吸道标本（尿、粪便、肛拭子、血液和结膜囊拭子）中均可检出2019-nCoV核酸阳性，见表3。

讨论

对于2019-nCoV核酸阳性率，本研究发现在8 274例核酸受检者中，2 745例（33.17%）2019-nCoV核酸检测阳性，5 277例（63.77%）阴性，252例（3.05%）由于只有一个靶标基因阳性而归为可疑。初次检测仅一个靶基因阳性的检测结果，是一种值得关注的情况。从临床检验的角度来看，可能有以下原因：（1）样本采集问题。样本的好坏会极大影响临床检测结果。首先，关于样本种类，一般公认下呼吸道样本检出率高于上呼吸