纠正试验：混合·孵育·纠正

去年写的对联，竞奇思妙想地想到了纠正试验。大概是因为，这个是我们接触出凝血检验之初，最容易着手去做的尝试，它操作简易、价格亲民、见微知著。昨天又有朋友留言，要聊一聊纠正试验那些事儿……

一、实验原理

①APTT的结果正常，只要求凝血因子活性在30%左右以上；

②正常混合血浆的因子活性在100%左右；

③APTT延长的标本与正常血浆1：1混合后，即使标本中因子为0，混合仍有50%的因子，足以使APTT正常；

④纠正：混合后APTT正常，说明原标本缺乏因子；未纠正：混合后时间依然延长，说明原标本存在抑制物。

⑤通过孵育2小时，判断该抑制物是狼疮抗凝物还是因子抑制物，若孵育后APTT明显延长，提示存在时间温度依赖性的因子抑制物，反之存在狼疮抗凝物。

二、操作步骤

①标本A，正常混合血浆B，标本+正常混合血浆（1：1）C，同时检测上述三管样本的APTT，分别记录为A1，B1，C1；

②上述A、B、C管封口，置于37℃水浴箱2小时后取出，从A和B中各取等量血浆1：1混合置于D管，立刻检测上述四管样本的APTT，分别记录为A2，B2，C2，D2；实验结束。

注：正常混合血浆的制备，20人份以上健康人的血浆充分混合，如从实验室获取标本，要求外观无脂浊、黄疸、溶血，避免创伤、手术、肿瘤、孕妇等可能有急性时相反应蛋白增高者；分装-20℃保存2周，-70℃保存半年。商品化的来源更佳。

三、结果解读

结果的判读是重点、难点，目前尚无统一共识；判断是否纠正分两个部分，一是即刻纠正试验是否纠正；二是孵育纠正试验是否纠正。

①即刻纠正试验：只涉及到A1，B1，C1。

方法1：看C1是否在APTT的参考区间内，在内认为纠正，超出范围认为未纠正，这个方法简单粗暴、快捷便利。例如实验室APTT正常参考区间（23-40s），那么判断界值是40；C1=35s，那么就是纠正的，因子缺乏；C1=42s，那么就是未纠正，存在抑制物（狼疮抗凝物/因子抗体等）。

方法2：看C1与实验室正常APTT+2/3个标准差相比较.例如实验室APTT正常参考区间（23-40s），但实验室正常APTT是33.5s（该数值来源于20以上健康人的APTT几何平均值），一个标准差是1.8，那么判断界值是37.1或38.9s。

方法3：看C1与B1相比较，延长5s（或10s）以上，视为未纠正。例如B1=32.5，判断界值是37.5或42.5s。

方法4：看C1与B1的比值，例如35s/32.5s=1.08，该比率大于1.1或1.2，视为未纠正，反之纠正。

方法5：用Rosner index（R值）判断，R=（C1-B1）/A1×100，例如C1=35s，B1=32.5s，A1=54.4，则R=(35-32.5)/54.5×100=4.6，将该R值与实验室建立的界值（例如文献推荐11或15）比较，大于该界值未纠正，反之纠正。

……

Seminars inThrombosis &Hemostasis, 2013, 39(03):283-290.

②孵育试验：

方法1：看C2与C1比较，即2小时孵育后比即刻检测的APTT时间明显延长，例如有些文献推荐的界值为10s，大于该界值未纠正，提示因子抑制物。

方法2：看C2与D2比较，即混合孵育2小时比孵育2小时再混合的APTT时间延长，例如有些文献推荐的界值为3s，大于该界值未纠正，提示因子抑制物。

方法3：看C2与D2的比值，即（混合孵育2小时-孵育2小时再混合的APTT）/孵育2小时再混合的APTT×100%，该比值大于某界值，例如10%，提示未纠正，存在因子抑制物。

……

纠正试验结果解读，正如我们此前所述，该试验是一个筛选试验，有其缺陷，例如一些滴度较低的狼疮抗凝物或滴度较高的因子抑制物，可能出现即刻纠正或不纠正的情况。

纠正试验结果解读

例如狼疮抗凝物滴度较低时，1：1混合后的稀释效应，可以使狼疮抗凝物的影响更小，使原来延长的APTT变为正常，看似纠正而误判为因子缺乏的结果。因此要综合更多的检查和临床症状考虑。

例如因子抑制物滴度较高时，1：1混合后即刻检测也无法纠正，看起来会误判为狼疮抗凝物，但此时再看2h孵育试验，往往比狼疮抗凝物的延长更加显著得多。当然，病史和临床特点不可忽略，毕竟这两种情况出不出血还是“爱憎分明”的。