操作熟练，机制却不理解？核酸检测的这些重点需要掌握！

小博士 2022-11-7 05:22 PM 2482人围观技术

随着严控举措的实施，新冠病毒的肆虐流行得到有效遏制，我们又有了调整的间隙。在核酸批量筛检的过程中，不少同仁存在操作熟练，但机制却不甚明了的问题。基于此，我们总结了一下，把新冠病毒核酸检测中可能涉及到的内容进行梳理，以期帮助广大同仁能够“知其然，更知其所以然”。

一、新冠肺炎疑似病例

是指具有流行病学史中的任意一条，且符合临床表现中任意两条的患者，即为疑似病例。

流行病学史：

1.发病前14天内有疫区或其他有本地病例传播地区的旅行史或者居住史；

2.发病前14天内曾接触过来自疫情发源地，或者接触过本地病例持续传播地区的发热或有呼吸道症状的患者；

3.有聚集性发病或与新型冠状病毒感染者有流行病学关联。

临床表现：

发热；出现肺炎影像学特征；血常规检查异常。

2、新冠肺炎聚集性病例

是指2周内在小范围如家庭、办公室、学校班级等场所，出现2例及以上有发热和/或呼吸道症状的病例。

3、口咽/鼻咽拭子

是常用于新冠病毒核酸检测的标本类型，前者主要在双侧咽扁桃体及咽后壁采集标本，后者则在鼻道内鼻腭处采集标本。前者多用于筛检，后者的阳性率高于前者。

4、多重PCR技术

又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上2对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应。

其反应原理、反应试剂和操作过程与一般PCR相同，主要用于多种病原微生物的同时检测或鉴定和病原微生物以及某些遗传病及癌基因的分型鉴定。

5、荧光探针技术

荧光探针即为一可与靶基因序列互补结合的寡核苷酸，其两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。在PCR扩增过程中，每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了检测荧光强度定量分析PCR产物。

6、RT-PCR

即逆转录-聚合酶链反应，是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶式扩增（）PCR)相结合的技术，常用于RNA病毒的分子诊断。

7、ORF1ab与N基因

ORF1ab与N基因为当前双靶标检测新冠病毒常用的两种靶基因。前者为开放读码框1ab（Open reading frame 1ab，ORF1ab）、后者为核衣壳蛋白编码基因（Nucleocapsid protein，N）。

8、管家基因

管家基因是指这样一类基因，其序列高度保守，并且可在大多数情况下持续表达，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的，常被用于分子技术--多位点基因分析。

9、内参照

是指在PCR扩增体系中，加添的另外一种靶基因序列，以反映核酸提取质量、反应体系质量及扩增效果。常使用管家基因作为内参照基因。新冠核酸检测试剂盒中常采用人类管家基因RNaseP作为内参照基因。

10、UNG酶

即尿嘧啶-N- 糖基化酶，此酶可选择性水解断裂含有dU的双链或单链DNA中的尿嘧啶糖苷键，形成的有缺失碱基的DNA链，后者在碱性介质以及高温下会进一步水解断裂、破坏殆尽。PCR试剂盒引入此酶主要用于防止前后污染。

11、基线荧光阈值 Ct值

基线

是指在PCR扩增反应的最初数个循环里（常为3-15个循环），荧光信号变化不大，接近一条直线，这样的直线即是基线。

荧光阈值

一般将PCR反应前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值是PCR3-15 个循环荧光信号标准差的10倍，荧光域值常设定在PCR扩增的指数期。

CT值

表示每个PCR反应管内荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。各模板的CT值越小，模板起始拷贝数越多，反之亦然。

12、荧光通道

通俗地讲，荧光通道指的是针对每一种荧光的检测器。针对多个靶基因，一个管中做多个颜色，每一个针对不同颜色的检测器，就是一个通道。

新冠病毒核酸检测常用的荧光检测通道为FAM、VIC/HEX、ROX。

13、最低检测限

是指所用方法能够检测出的目的基因/产物的最小拷贝数/含量。

14、阳性质控品

即用于试验中阳性质控的质控品，新冠核酸病毒检测试剂盒中常用的阳性质控品为含N基因与ORF1ab目的基因片段的体外转录RNA。

15、常见结果图示

阴性

阳性

内标未扩增

双靶标阳性，到CT值大于37

单靶标阳性

【参考文献】

[1]新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第八版）

[2]新型冠状病毒肺炎防控方案（第九版）

[3]PCR最新技术原理、方法及应用，第3版，化学工业出版社

[4]360百科，荧光探针。

[5]新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南。

编辑：yeah 审校：小冉

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来源: 德安检验漫谈

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