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建议收藏 | 8种新冠核酸异常扩增曲线详解

归去来兮 2022-8-17 04:08 PM 6805人围观 技术


作者:黄斐

审核:郭玮

单位:复旦大学附属中山医院检验科



实时荧光PCR技术是新冠病毒核酸检测的主要方法。每一个标本的检测结果都会以一张扩增曲线图呈现,需要我们的“专业慧眼”去辨析,判断出“阴性”还是“阳性”。在实际工作中,核酸扩增曲线并非次次“完美”,易受到多种因素影响。因此如何判读扩增曲线,对准确报告新冠核酸检测结果至关重要。


正常扩增曲线长啥样?

正常扩增曲线呈S型,分为基线期、指数起始期、指数扩增期和平台期,且要求拐点清楚,整体平行性好,基线平而无上扬现象。


异常扩增曲线解析

异常扩增曲线是核酸检测人员最为头疼的问题。辨别扩增曲线形态、分析产生异常扩增曲线的原因是检测人员的必备技能。每一条扩增曲线的判读需要慧眼识别和经验处理。我们总结了检测过程中遇到过的异常扩增曲线,与大家进行分享。

01

内标扩增曲线异常

正常的内标扩增曲线是实验有效性的基础,可反映样本质量、抽提和扩增效率。

曲线特点

【类型一】某标本内标无S型扩增曲线。

【类型二】外源性内标呈离散型曲线。


原因分析

a) 标本采样欠佳,没有刮取到足够的鼻咽部细胞。

b) 标本保存不当,核酸降解。

c) 标本加错位置或漏加。

d) 提取失败:裂解液未混匀(外源性内标)、提取仪故障等。

e) 扩增失败:漏加反应液、模板加错孔位、混入抑制扩增反应的干扰物等。


解决方案

a) 重新采集样本。

b) 送检标本及时检测,室温放置不超过4h。

c) 按照规范化流程进行相关操作。

d) 定期对在岗人员进行操作考核。


【注】内标扩增曲线异常,则该批或相应标本结果无效,需重新采样或重新检测。

02

基线设定不当的异常扩增曲线

曲线特点:软件默认基线设定的扩增曲线呈波浪型,导致Ct值偏大,可能会被误判为阴性。


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来源: 检验医学网
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