读懂免疫检测方法

刚开始学免疫的的时候，总是被各种免疫检测方法搞得晕头转向，本文尝试用简单易懂的语言来回顾一下几种常见的免疫检测方法。

单克隆和多克隆

免疫分析检测主要检测待测样本中抗原或者抗体。

检测抗原则采用相应的抗体，检测抗体则采用相应的抗原。

根据抗体结合表位数量的不同可以分为单克隆抗体和多克隆抗体。

单克隆抗体和多克隆抗体都可用于检测抗原，每种抗体都有很强的特异性。

单克隆抗体是由相同的免疫细胞产生的，这些细胞都是一个独特的母细胞产生的克隆，单克隆抗体提供了一种无限来源的同质抗体。

由于单克隆抗体能特异性地与抗原的单个表位结合，常被用于免疫检测中的一抗。

相比之下，多克隆抗体是一种抗体的混合物，可以结合到具有多个结合位点的抗原。

多克隆抗体能够识别目标分子的不同表位，可用于检测未知抗原，一般在免疫检测中被用作二抗。

它的作用是结合到不同的抗原表位并放大信号，提高检测灵敏度和特异性。

夹心法

有了一抗和二抗，中间夹着抗原，就是著名的夹心法。

检测抗原的双抗体夹心法形成的复合物是一抗+抗原+二抗，一般一抗包被在磁珠上，二抗包被在相应的发光物质或者酶上，检测光强度，光信号转换成电信号，获得结果。

一般的抗原，也就是蛋白质，其孔间距离足够大，有空间同时结合两个抗体。

夹心法同样适用于检测抗体，一般采用双抗原夹心法检测抗体。

如果待测的抗原过小，则无法完成同时结合两个抗体的壮举，也就没办法采用夹心法进行检测了。

比如类似游离T3或T4这种小分子多肽，这时候一个抗体就已经完全包裹抗原，没有多余的空间位置再去结合第二个抗体。

这种小分子抗原的分子量一般都小于1000道尔顿，顺便提一下，它们因为太小了，一般不具有免疫原性。也就是进入机体不能产生抗体，必须与载体蛋白偶联形成全抗原，才可具有免疫原性。

于是就有了竞争法。

竞争法

竞争法主要是用于小分子多肽的检测，是一种不得已而为之的办法。

主要原理就是加入标记的抗体和标记的抗原，待测抗原和已标记的抗原试剂进行竞争，待测抗原阻断标记抗原结合的能力，因为抗体中唯一的结合位点已经被占据。

因此在竞争法中，检测中测量到的标记和结果之间成反比关系，测量到的标记量越少说明样本中的抗原量越多。

很显然，如果可以应用夹心法肯定还是选择夹心法，毕竟在两种抗体的结合下，其灵敏度和特异性必然更好。

竞争法不但用于检测抗原，也用于检测抗体。

目前应用竞争法的试剂有包括游离PSA、TSH、游离T4和部分性激素等小分子抗原，抗体中包括乙肝五项中的e抗体和核心抗体大多数也采用竞争法检测。

检测抗体使用竞争法主要是因为抗原结合特异性不稳定时采用，乙肝e抗体和核心抗体的检测中，e抗原和核心抗原相比只多了29个氨基酸，e抗原很容易变为核心抗原，因此这两个抗体均采用竞争法。

以e抗体检测为例，其原理是将待测物、包含e抗原的中和试剂以及标记的e抗体混合，待测物中的e抗体和标记的e抗体竞争中和试剂中的e抗原。

如果是两步法的试剂，则在第一步反应完成后再加入标记的e抗体，形成抗体-抗原-抗体复合物，再检测光强度进行获得结果。

对于一般的抗原抗体反应，尤其是传染病相关项目，均建议采用两步法，以避免钩状效应，造成假阴性或假阳性的发生。