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读懂免疫检测方法

归去来兮 2022-1-6 48人围观 技术


刚开始学免疫的的时候,总是被各种免疫检测方法搞得晕头转向,本文尝试用简单易懂的语言来回顾一下几种常见的免疫检测方法。

 

单克隆和多克隆


免疫分析检测主要检测待测样本中抗原或者抗体。


检测抗原则采用相应的抗体,检测抗体则采用相应的抗原。


根据抗体结合表位数量的不同可以分为单克隆抗体和多克隆抗体。


单克隆抗体和多克隆抗体都可用于检测抗原,每种抗体都有很强的特异性。


单克隆抗体是由相同的免疫细胞产生的,这些细胞都是一个独特的母细胞产生的克隆,单克隆抗体提供了一种无限来源的同质抗体。


由于单克隆抗体能特异性地与抗原的单个表位结合,常被用于免疫检测中的一抗。

相比之下,多克隆抗体是一种抗体的混合物,可以结合到具有多个结合位点的抗原。


多克隆抗体能够识别目标分子的不同表位,可用于检测未知抗原,一般在免疫检测中被用作二抗。


它的作用是结合到不同的抗原表位并放大信号,提高检测灵敏度和特异性。

 

夹心法


有了一抗和二抗,中间夹着抗原,就是著名的夹心法。


检测抗原的双抗体夹心法形成的复合物是一抗+抗原+二抗,一般一抗包被在磁珠上,二抗包被在相应的发光物质或者酶上,检测光强度,光信号转换成电信号,获得结果。


一般的抗原,也就是蛋白质,其孔间距离足够大,有空间同时结合两个抗体。


夹心法同样适用于检测抗体,一般采用双抗原夹心法检测抗体。


如果待测的抗原过小,则无法完成同时结合两个抗体的壮举,也就没办法采用夹心法进行检测了。


比如类似游离T3T4这种小分子多肽,这时候一个抗体就已经完全包裹抗原,没有多余的空间位置再去结合第二个抗体。


这种小分子抗原的分子量一般都小于1000道尔顿,顺便提一下,它们因为太小了,一般不具有免疫原性。也就是进入机体不能产生抗体,必须与载体蛋白偶联形成全抗原,才可具有免疫原性。


于是就有了竞争法。


竞争法


竞争法主要是用于小分子多肽的检测,是一种不得已而为之的办法。


主要原理就是加入标记的抗体和标记的抗原,待测抗原和已标记的抗原试剂进行竞争,待测抗原阻断标记抗原结合的能力,因为抗体中唯一的结合位点已经被占据。


因此在竞争法中,检测中测量到的标记和结果之间成反比关系,测量到的标记量越少说明样本中的抗原量越多。


很显然,如果可以应用夹心法肯定还是选择夹心法,毕竟在两种抗体的结合下,其灵敏度和特异性必然更好。


竞争法不但用于检测抗原,也用于检测抗体。


目前应用竞争法的试剂有包括游离PSATSH、游离T4和部分性激素等小分子抗原,抗体中包括乙肝五项中的e抗体和核心抗体大多数也采用竞争法检测。


检测抗体使用竞争法主要是因为抗原结合特异性不稳定时采用,乙肝e抗体和核心抗体的检测中,e抗原和核心抗原相比只多了29个氨基酸,e抗原很容易变为核心抗原,因此这两个抗体均采用竞争法。


e抗体检测为例,其原理是将待测物、包含e抗原的中和试剂以及标记的e抗体混合,待测物中的e抗体和标记的e抗体竞争中和试剂中的e抗原。


如果是两步法的试剂,则在第一步反应完成后再加入标记的e抗体,形成抗体-抗原-抗体复合物,再检测光强度进行获得结果。


对于一般的抗原抗体反应,尤其是传染病相关项目,均建议采用两步法,以避免钩状效应,造成假阴性或假阳性的发生。


来自: 云起IVD | 作者:阁主Pro
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