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微生物鉴定如何选择生化反应种类,这几个小窍门务必要知道 ... ...

归去来兮 2021-9-27 72人围观 技术




尽管当前自动化微生物学检测设备被不断地引入使用,但传统的生物学检测技术在细菌鉴定中仍然占据一定的席位。在基层医疗机构中,传统检测技术仍然是工作的主流。基于生化鉴定反应是传统生物学技术的主要组成部分,故细菌鉴定结果的精准程度有赖于生化反应的选择与操作细节。


如何选择生化反应种类,如何规范操作,才能实现鉴定工作事半功倍呢?作者同大家一起分享、交流一些经验。


01

严格无菌操作


无菌意识及无菌操作贯穿整个微生物学检验流程的始终。从标本采集、运送、接种、菌株鉴定、药敏试验、医疗废物的处理等,均需要严格执行。

各级医疗机构对于实验室分区设计,人/物/气流及压力走向,实验室设备配置,工作人员着装规范,操作技术训练与掌握,实验室耗材及废弃标本无菌处理等各个环节,均制定严格的无菌管理规范。无菌操作的目的就是保证标本、环境及人员生物安全,避免污染。


02

确保菌株分纯


在标本接种过程中,我们要根据标本中细菌的种类及数量的多少,选择相应的分区划线接种方式。

菌量大、种类多的标本,可以选择三区或五区划线接种;反之,可以选择蛇形划线。划线接种的目的就是得到单个菌落用于后续试验。若试验用菌纯度不够,则可能导致后续试验出现“四不像”的结果。


03

选择合适的菌龄


根据细菌的生长状况,人为地将细菌生长分为调整期、对数期、稳定期及衰亡期,以对数生长期细菌生物学特性最为典型。

故我们对细菌进行鉴定或其它试验,均选择对数生长期的细菌。


04

保证菌液浓度合适


进行生化反应时,目的菌菌液的浓度对于结果有一定的影响,浓度过高会导致假阳性,过低有可能导致假阴性。

常规的菌液浓度选择0.5麦氏比浊管浊度,相当于1.5亿/毫升菌量。      


05

培养基质控 


鉴定培养基即为生化反应管,应用之前应当进行质量控制。

先是观察外观有无破损、冷冻、受热、污染等状况,其次是进行标准菌株接种、空培养鉴定,结果符合要求时,才可以进行后续鉴定试验。


06

鉴别培养基选择尤为重要


总的来看,鉴定培养基包括糖醇类、蛋白类、盐类、酶类等。

基于不同种属的细菌,如肠杆菌科、弧菌科及非发酵菌阴性杆菌、微球菌科、链球菌科阳性球菌等,其营养要求程度、生长条件存在显著差异,不同菌属细菌鉴定用生化反应管,成分有所不同。

我们在实验过程中,务必注意不同菌属的细菌一定选择相应的培养基,切勿混用。如此类推,我们在使用全自动微生物鉴定仪时,鉴定卡的选择同样要遵循这样的规则,一旦选错,结果就会不伦不类了。


07

合适的培养条件


目前细菌培养方式分为需氧培养、二氧化碳培养及厌氧培养三种方式,我们务必依据标本类型、疑似病原菌种类选择培养方式,切勿千篇一律,造成漏检漏诊。


08

无菌矿物油的使用


为避免环境中氧气对反应产物的干扰,部分生化反应需要滴加无菌石蜡油以隔绝空气。


09

把握结果观察时间


部分生化反应检测的成份是细菌代谢过程中的阶段性产物,或者部分生化反应结果出现在细菌反应过程中的某个阶段,故观察试验结果务必把握好时间。

避免较早、较晚观察结果造成的假阴性/阳性结果。如炭疽芽胞杆菌的串珠试验,较早观察,尚未形成串珠现象,但较晚观察,则会因青霉素作用时间较久导致细菌完全破裂消失。


10

合理选择生化反应种类


不仅不同菌属的细菌生化反应存在差异,同一种属不同型别的细菌也会有所不同。所以我们查看生化反应结果时会看到(-/+),或者是(x%)的表示方法。这样的表示方法,表明该菌属细菌部分阳性,部分阴性;或者说x%的菌株阳性,(1-x)%的菌株结果阴性。但我们一定要知道,对于某个菌株而言,它只能是阳性或者阴性的结果。

那我们该如何选择生化反应呢?一般而言,我们尽量选择那些100%阴性或阳性的试验,这样有利于结果判断。但若该菌属细菌对所有的生化反应均不特异,那我们就要尽量多选择一些生化反应来检测,以提高结果判断概率。

现在很多医疗机构都采用了自动化设备进行细菌鉴定,而且生化反应种类是世界统一,至少是国内统一的,的确给我们在工作过程中省却了不少的麻烦,但我们一定要清楚生化反应的选择原则,不能只是一味地依赖设备。


11

合理选择生化反应种类


传统生物学检测方法目前在基层医院仍在使用,它也是自动化鉴定的依据与基础。伴随着各种特异性、灵敏度较高的方法的使用,传统生物学检测方法在微生物学检验中的地位与作用有所下降。通常情况下,若有更为高级的方法,那么传统的生物学鉴定结果仅作为参考,鉴定结果以高级的方法为主。

来自: 德安实验诊断 | 作者:郭小兵
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