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《胰岛素测定试剂注册技术审查指导原则》(中)

笔者苏洛 2018-11-15 12:00 AM 1660人围观 技术

1.准确度

1)与国家标准品(或国际标准品)的比对分析

确度的评价可采用与国家标准品(或国际标准品)的比对分析。用试剂盒缓冲体系将胰岛素国家(或国际)标准品配制成与试剂盒校准品相应的(一般应不少于5个)浓度点,试剂盒校准品与相应的国家(或国际)标准品同时进行分析测定,每点平行测定不少于2次,用双对数或其他适当的数学模型拟合,计算两条剂量反应曲线的斜率和效价比,两条剂量反应曲线应不显著偏离平行(t检验);以国家(或国际标准品为对照品,试剂盒内校准品的实测值与标示值的效价比应在0.9001.100之间。

2)与国家标准品(或国际标准品)的偏差分析

在试剂盒的线性范围内,配制23个不同浓度的国家标准品(或国际标准品)进行复孔检测,计算每个浓度测定值的平均值M,根据公式:测量偏差=M-理论值)/理论值×100%,分别计算各浓度的相对偏差,应在±15.0%范围内。

3)与企业准确度质控品的偏差分析

分析方法同2

2.空白

空白限的确定常使用同批号试剂对零浓度校准品(或校准品稀释液)进行至少10次重复检测,计算所得信号值均值()和标准差(SD),将(+2SD)带入剂量反应曲线,计算出的浓度值即为空白限。空白限应不高于2.0mIU/L

3.线性范围与线性

建立试剂线性范围所用的样本基质应尽可能与临床实际检测的样本相似,理想的样本为分析物浓度接近预期测定上限的混合人血清,且应充分考虑多倍稀释对样本基质的影响。建立一种定量测定方法的线性范围时,需在预期测定范围内选择711个浓度水平。例如,将预期测定范围加宽至130%,在此范围内选择更多的浓度水平,然后依据实验结果逐渐减少数据点直至表现出线性关系,确定线性范围。线性范围的下限不高于5.0mIU/L,线性范围的上限不低于160mIU/L

线性可使用试剂盒校准品进行验证,用双对数或其他适当的数学模型拟合,线性相关系数r应不低于0.9900。也可以取INS国家(或国际标准品(或其他高浓度样品),按照试剂盒说明书声称的线性范围,配制适当的(一般应不少于5个)浓度点,建立相应的拟合曲线,其线性相关系数r应不低于0.9900

4.精密度

精密度的评估应使用23个浓度水平的质控品或样本进行测定,浓度宜包括医学决定水平附近的浓度值。

一般包括分析(批)内精密度、批间精密度的评价。

1)分析内精密度:同一批次的测定试剂对线性范围内的23个浓度的质控品或样本进行重复测定不少于8次,计算测量结果的平均值()和标准差(SD),根据公式CV=SD/×100%得出变异系数(CV),手工操作试剂盒质控品或样本测定结果的CV值应不大于15.0%,全自动免疫分析系统试剂盒质控品或样本测定结果的CV值应不大于8.0%

2)批间精密度:用不少于3个批次的测定试剂对线性范围内23个浓度的质控品或样本进行独立分析,计算3批测量结果的平均值()和标准差(SD),根据公式CV=SD/×100%得出变异系数(CV),CV值应不大于20.0%

5.分析特异性

1)交叉反应:易产生交叉反应的其他蛋白质激素等的验证情况,应至少验证与胰岛素原(Pro-Insulin)和C-肽(C-Peptide)的交叉反应情况,其中胰岛素原浓度不低于10ng/mLC-肽浓度不低于20ng/mL,在胰岛素测定试剂盒上的测定结果应不高于3.0mIU/L

2)干扰物质:样本中常见干扰物质对检测结果的影响,如对高脂、黄疸、溶血、类风湿因子、嗜异性抗体等干扰因子的研究(结果应量化表示,禁用轻度、严重等模糊表述)。

6.钩状(Hook)效应(如适用)

说明不会产生Hook效应的浓度上限或相关研究。每个浓度重复3份,对Hook效应进行合理的验证。建议在产品说明书上明示对Hook效应的研究结果。

7.抗凝剂的影响(如适用)

如果试剂盒适用样本类型包括血浆样本,应采用各种适用抗凝剂抗凝的血浆样本分别与血清样本进行对比实验研究。方法为对比线性范围内的同一病人的血清和血浆样本(不同抗凝剂至少20例),应包含医学决定水平以及低值浓度样本进行检测以验证申报试剂对于血清和血浆样本检测结果的一致性。

8.方法学比对(如适用)

采用参考方法或国内外普遍认为质量较好的已上市同类试剂作为参比,与拟申报试剂同时检测同一批样本(至少40例),从测定结果间的差异了解拟申报试剂与参比方法间的偏倚。如果偏倚很小或在允许的误差范围内,说明两检测系统对病人样本测定结果基本相符,拟申报试剂与参比方法相比,对同一份临床样本的医学解释不会产生差异结果。

在实施方法学比对前,应分别对拟申报试剂和对比试剂进行初步评估,只有在确认两者都分别符合各自相关的质量标准后方可进行比对试验。方法学比对时应注意质量控制、样本类型、浓度分布范围并对结果进行合理的统计学分析。

性能指标的评价方法并无统一的标准可依,可根据不同的试剂特征进行,前提是必须保证研究的科学合理性。具体实验方法可以参考相关的CLSIEP文件或国内有关体外诊断产品性能评估的文件。

参考区间确定资料

指参考区间确定所采用的样本来源、确定方法以及详细的试验资料。样本来源应考虑不同年龄、性别等因素。建议参考CLSI EP28A3C


来源: IVD体外诊断
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