分析方法学验证：精密度和准确度

​

就像方法验证中的定量限和检测限，精密度和准确度也是紧密相关的两个项目。良好的精密度是方法具有较好准确度的必要条件，但是良好的准确度还与其他因素（如基质干扰、溶液配制、结果计算等）有关。

​

在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性;

在同一实验室内的条件改变，如不同时间、不同分析人员、不同设备等测定结果之间的精密度，称为中间精密度;

不同实验室测定结果之间的精密度，称为重现性。

准确度：准确度系指用所建立方法测定的结果与真实值或参比值接近的程度。一般用回收率（Recovery）表示。

准确度应在规定的线性范围内试验。

准确度可由所测定的精密度、线性和专属性推算出来。

那为什么说精密度和准确度是研发人员一个追求的目标呢？

首先：不是所有的方法都需要精密度和准确度的，比如定性方法。

其次：定义中可以看出来它们代表的都是一种接近程度。对于程度的探寻，它是永无止境的。

最后：我们需要了解方法验证的目的，除了证明方法满足预期用途之外，更重要的一点就是确认方法误差的来源和大小。方法的精密度和准确度取决于方法开发过程，因此它是一个研发人员追求的目标。

​

​

一）系统误差：它是由某种确定的原因引起的，一般有固定的方向（正或负）和大小，重复测定可重复出现。根据系统误差的来源，又可区分为方法误差、仪器误差、试剂误差及操作误差等。

​

方法误差：由于分析方法本身的缺陷或不够完善所引起的误差。例如，在滴定分析法中，由于滴定反应进行不完全，或干扰离子的影响，导致终点判断不准确。

​

仪器误差：由于所用仪器本身不够准确或未经校正所引起的误差。例如，砝码、滴定管刻度不够准确等。

​

试剂误差：由于试剂不纯或含有杂质引入的误差。

​

操作误差：由于操作人员的习惯而引起的误差。例如，读取滴定管的读数时偏高或偏低。

​

这类系统性误差（Systematic error）实际影响的是结果的真实性（Affect Trueness），即与真实值的偏离程度。

​

二）偶然误差：或称随机误差，它是由不确定的原因引起的，可能由于实验时环境的温度、湿度和气压的微小变化以及其他操作条件的微小波动所造成，其方向（正或负）和大小都不固定。

​

这类随机性误差（Random error）实际影响的是结果的精密度（Affect Precision），即数据间的离散程度。

​

讲到这，相信大家对准确度和精密度已经有了一个基本的认识了。准确度，它是一个综合的结果，它是所有误差相互作用后的最终体现。而精密度，它是通过统计学工具呈现出来的数据结果的偏差大小，主要是反映随机误差的影响。

​

这里为了便于大家理解，我们将准确度称为总体准确度（Overall Accuracy），它的含义是将测试样品制备的误差、基质的干扰以及结果计算的误差都考虑进去。即

基质干扰

基质的干扰指的是测试溶液中除目标物以外的所有成分（对于有关物质而言，其主成分、溶剂、其他杂质都是干扰基质），对目标物检测产生的干扰（如增强或抑制）。因此，这也是为什么在进行准确度验证的时候，法规指南推荐的方法是加标回收率，主要目的就是评估基质的干扰。

​

为什么要把这两个放到一起来说？

​

就像方法验证中的定量限和检测限，精密度和准确度也是紧密相关

​

1、精密度：

​

做法：

在规定范围内，取同一浓度（分析方法拟定的样品测定浓度，相当于100%浓度水平）的供试品，用至少6 份的测定结果进行评价;

设计至少3 种不同浓度，每种浓度分别制备至少3 份供试品溶液进行测定，用至少9 份样品的测定结果进行评价。

注意的是：采用第二种方法进行评价时，浓度的设定应考虑样品的浓度范围。

​

要求：

精密度的结果应报告标准偏差、相对标准偏差或置信区间。样品中待测定成分含量和精密度RSD可接受范围参考表3。

的两个项目。良好的精密度是方法具有较好准确度的必要条件，但是良好的准确度还与其他因素（如基质干扰、溶液配制、结果计算等）有关。

​

在基质复杂、组分含量低于0.01%及多成分等分析中，精密度限度可适当放宽。对于这个指导原则中的可接受标准，本文不做过多评论。但建议的是在国内申报时，大家还是能做到就尽量去做到。

​

2、准确度

​

做法：

在规定范围内，取同一浓度(相当于100%浓度水平)的供试品，用至少6份样品的测定结果进行评价;

设计至少 3 种不同浓度，每种浓度分别制备至少3份供试品溶液进行测定，用至少9份样品的测定结果进行评价，且浓度的设定应考虑样品的浓度范围。两种方法的选定应考虑分析的目的和样品的浓度范围。

同时，由于准确度一般用回收率来表示，我们以原料药的含量和有关物质为例来说下回收率的做法。

1）含量测定方法的准确度---直接回收率

原料药含量测定时，由于目标物通常为纯物质，可以直接用已知纯度的对照品或供试品进行测定，直接计算回收率=测得值/实际值，或用所测定结果与已知准确度的另一个方法测定的结果进行比较。当原料药为多组分时，也可以使用加标回收率来测定。

原料药的含量，线性范围一般为实际测定浓度的 80%~120%，其目的是考虑到这一范围足够可以满足《药典》中规定“约” 的定义为 90%~110%的范围;

2）有关物质测定方法的准确度---加标回收率

原料药有关物质测定时，主要需考察基质或其它物质的相互干扰，因此可向原料药中加入已知量的杂质对照品进行测定，计算回收率=（测得量-样品中的量）/加入量。如不能得到杂质对照品，可用所建立的方法与另一成熟方法(如药典标准方法或经过验证的方法)的测定结果进行比较。

有关物质的测定，实际操作的范围应该是定量限(或报告限)至质量标准的120%以上，同时需要进行主成分线性范围的测定（最高浓度为实际测定时稀释后的浓度的120%以上，最低浓度为定量限浓度），用于校正因子的测定。

​

要求：

对于化学药应报告已知加入量的回收率(%)，或测定结果平均值与真实值之差及其相对标准偏差或置信区间（置信度一般为95%）; 样品中待测定成分含量和回收率限度关系可参考表2。 

​

同样的，在基质复杂、组分含量低于0.01%及多成分等分析中，回收率限度可适当放宽。

​

文章最后，我们再次强调一下：精密度和准确度是无法通过验证来提高的，而是通过验证我们确认了精密度和准确度的大小。