找回密码
 立即注册

QQ登录

只需一步,快速开始

微诊网 门户 资讯 科普 查看内容

如何看待抗 dsDNA 抗体?

2021-8-27| 发布者: 归去来兮| 查看: 112| 评论: 0|来自: 风湿时间 | 作者:聂顺利

摘要: 系统性红斑狼疮 (systemic lupus erythematosus, SLE) 是一个自身抗体相关的慢性自身免疫性疾病。对于这样一个慢性的疾病,医生们需要仔细评估 SLE 病人的病情波动,从而选择最合理的治疗措施。在评估病人病情时,我 ...

系统性红斑狼疮 (systemic lupus erythematosus, SLE) 是一个自身抗体相关的慢性自身免疫性疾病。


对于这样一个慢性的疾病,医生们需要仔细评估 SLE 病人的病情波动,从而选择最合理的治疗措施。


在评估病人病情时,我们通常会检测血常规、血沉、补体等。但是, 我们不应反复检测抗核抗体 (antinuclear antibody, ANA)、抗 Smith(Sm) 抗体、抗 Ro/SSA 抗体、抗 La/SSB 抗体和抗 U1 核糖核蛋白 (ribonucleoprotein, RNP) 抗体。


尽管这些自身抗体在明确诊断时很有益。但没有证据提示这些抗体跟疾病活动性有关。


不过,并不是所有自身抗体跟病情活动性无关。比如 ANCA 抗体就被认为跟病情活动性相关。虽然不能单凭 ANCA 抗体来评判,但该类抗体有一定提示价值。


在 SLE 病人诊疗时,抗 dsDNA 抗体也被认为跟病情活动性有一定关联。所以,ANA 等通常不复查,而抗 dsDNA 抗体是例外。


但是,这并非没有争议。


所有的抗体都存在对应的抗原。那抗 dsDNA 抗体对应的抗原是什么?是 dsDNA 吗?


抗 dsDNA 抗体可与 DNA 的糖-磷酸键骨架结合,与 dsDNA 和 ssDNA 都能进行反应。而且,可与各类物种的 DNA 起反应。这点让我们不得不思考,抗 ds-DNA 抗体针对的到底是哪个抗原?


临床上常规使用的检测方法有

  • Farr 试验

  • 绿蝇短膜虫试验

  • 酶联免疫吸附试验

  • 荧光磁珠法


红斑狼疮


一,Farr 试验


习惯上用盐酸在小牛胸腺提出 DNA。但提取过程里,双链 DNA 链可分裂为单链 DNA;而且,组蛋白可能掺杂其中。尽管已经有商品化的 DNA 产物,但其质量本身缺乏保证。


目前的共识,为确保 Farr 试验的准确性,应做到如下要求:

  • 提取的是双链 DNA,

  • DNA 的分子大小介于 10^5kDa~10^7kDa,

  • 抗原分子的大小均一


为确保满足上述要求,建议采用噬菌体 DNA 或者质粒。因为在提取噬菌体 DNA 时,它们更容易以原始双链形式分离出来。如采用其他对象做提取,很难确保为双链 DNA。


提取双链 DNA 后,用放射物做标记。然后再跟病人的血清混合。如果有抗 dsDNA 抗体,则可以形成放射标记的 DNA-抗 DNA 抗体复合物。该复合物在饱和度 50% 的硫酸铵溶液中沉淀, 从而被我们观测到。


Farr 试验的特异性可以到 95%~99%,而敏感性 32%~85%。


目前认为,对同一个病人反复采用 Farr 试验法检测,可反馈病人的疾病活动性,尤其是狼疮肾炎病情的活动性。


二,绿蝇短膜虫试验


绿蝇短膜虫 (Crithidia luciliae) 含有一个动基体或巨型线粒体。该巨型线粒体含有一个仅由 dsDNA 组成的小型环状 DNA。


先把绿蝇短膜虫处理固定;再把病人的血清做不同程度的稀释,然后滴定到固定后的绿蝇短膜虫上。再观测是否有荧光染色显像。从而判定是否存在不同滴度的抗 dsDNA 抗体。


这个方法其实就是间接免疫荧光法。只是底物为处理过的绿蝇短膜虫。


该方法的特异性 99%~100%,而敏感性 13%~47%。但需注意,低密度脂蛋白和 IgG 的复合体可误导结果,出现假阳性。


跟 Farr 试验类似,可以反馈 SLE 病人的病情活动性,尤其是狼疮肾炎的活动性。


三,酶联免疫吸附试验


噬菌体 DNA 不适宜用在这种方法里;只能用生物素结合小牛胸腺的 DNA。


酶联免疫吸附试验 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 的具体方法如下:提取 dsDNA 并包被到塑料微孔板上;使用人免疫球蛋白的荧光酶标做二抗;病人血清加入二抗后再滴到微孔板上。如有荧光现象则提示存在抗 dsDNA 抗体。


该方法的特异性 71%~97%,而敏感性 44%~79%。


总的来说,该方法的特异性不够理想。提取的 dsDNA 的质量可能对该方法的特异性有很大影响。


很多学者质疑该方法能否反馈 SLE 病情的活动性。笔者自身的经验是,该方法在反馈 SLE 病情活动方面的特异性不够。


四,荧光磁珠法


将 dsDNA 与荧光微球耦连,先将微球与患者血清一起孵育,随后再与藻红蛋白标记的二抗抗血清 (抗人类免疫球蛋白) 孵育。流式细胞计用于检测和定量结合至微球的荧光水平,而荧光水平与血清中抗体的浓度相关。


五,如何看待 ANA 阴性,而抗 dsDNA 阳性


ANA 的标准测定方法是用 Hep-2 作底物,采用间接免疫荧光法(IIF 法)测定。HEp-2 细胞含大量 dsDNA,若抗 dsDNA 抗体检测结果为阳性,则 IIF 法检测 ANA 也应为阳性。


如采用包被抗原的荧光微球来筛检 ANA,也不会出现 ANA 阴性,而抗 dsDNA 阳性。因为测 ANA 的荧光微珠包被的抗原里包括 dsDNA。


所以,ANA 阴性而抗 dsDNA 抗体阳性,则多半存在检验错误。


六,抗 dsDNA 抗体的检验价值


目前较为肯定的是,Farr 试验和绿蝇短膜虫试验测定的抗 dsDNA 抗体可以反馈 SLE 病情活动。尤其是狼疮肾炎的活动性。


但也有研究发现,SLE 病情活动所致的神经精神症状,抗 dsDNA 抗体与之无关联。


ELISA 法、荧光磁珠法测定的抗 dsDNA 抗体跟 SLE 病情的活动性的关联性不确定。


不同方法测定的抗 dsDNA 数值间没有可比性。如 ELISA 法阳性,而 Farr 阴性则未必说明病情好转,与之相反也如此。


总的来说,SLE 病情的活动性还是要看临床症状、体征,脏器损伤指标;抗 dsDNA 抗体有帮助,但有限。


文中图片来自图虫创意


参考资料:
1,《Dubois』 Lupus Erythematosus and Related Syndromes》(第 9 版)
2,《Systemic Lupus Erythematosus:Basic, Applied and Clinical Aspects》(第 2 版)
3,Uptodate 临床顾问
4,《Autoantibodies》(第 3 版)
我有话说......