Knock-out Validation---抗体特异性验证知多少？

抗体是生命科学领域最常用的工具之一。最普遍的用法是在 Western blot中揭示细胞或组织样本中特定蛋白质的表达量的多少。此外，它们也常被用于免疫组化和免疫荧光染色，以便于在显微镜下可视化地观察蛋白，以及其它各类基于抗体与特定生物分子结合的实验。

《Nature》报道曾指出由于有些非特异的和不可靠的抗体存在，全球用于蛋白识别的大约50%的科研经费被白白浪费了，可见抗体品质对于科研工作的重要性。特异性不足、敏感度和批次差异性等导致了错误的科研发现和大量的科研精力浪费。抗体的不可靠性造成了癌症、代谢、老化、免疫学和细胞信号转导以及任何研究复杂的生物分子的领域的巨大损失。因抗体而造成的、在时间和资源方面的浪费非常巨大。

2016年9月，国际抗体验证工作组 IWGAV（International Working Group for Antibody Validation）在 Nature Methods 上发表了首篇关于验证抗体特异性策略的提议，强调了抗体具有良好特异性的重要性。

确保抗体能够特异性识别其预期靶标，并持续保持相似的性能，能够让按照既定实验方案操作的使用者最终都能获得可信的、可重复的结果。然而，让人无奈的是，抗体常常会在识别目标靶点的同时也识别其它抗原, 也就是出现非特异性反应。

2008 年的一项抽样调查发现，市售的约 6000 种常用抗体中，超过一半的抗体有非特异性反应。非特异性反应困扰着很多使用者。高特异性抗体对实验的顺利进行起到了至关重要的作用。

目前，全球有数百家抗体供应商提供着百万种抗体产品。统一标准的缺失和部分厂商质控不严谨，导致抗体的质量不一，且抗体本身具有生物学上的多样性，因此，用户常常会因为未能使用高质量的抗体影响研究进展。为解决用户对于高质量抗体的需求，顶尖抗体品牌对保证抗体特异性越来越重视，通过各种检测方法来进行特异性验证，比如用敲除突变体作为阴性对照，即通过敲除验证来确保抗体质量的方法。

英国的生命科学试剂供应商Abcam的首席执行官Alan Hirzel表示，为了验证出售的抗体的质量，该公司使用了可以精细调整DNA的CRISPR–Cas9基因组编辑方法。该公司计划在各种目标基因经CRISPR–Cas9技术切除的人类细胞系中验证抗体，然后把每个抗体的验证结果发布出来。

2017年12月，生物谷曾就相关话题采访了Abcam中国区总经理张珏女士。张珏女士在采访中谈到：Abcam从成立开始就对所生产和销售的产品有极高的质量要求，致力于提供更优质的产品、更完善的服务，帮助生命科学研究工作人员尽快实现科研使命。2015年开始Abcam英国总部计划每年验证一定数量的抗体，迄今为止已经有一千多个抗体通过了堪称业内最严格的抗体特异性验证——敲除验证（Knock-out Validation）。在这里容我插一句：其实早在2015年，第一个通过敲除验证的商业抗体，也正是Abcam的产品，而且那时候生物谷也进行了报道。

近年来随着各种抗体大量涌入市场，伴随而来的质量隐患越来越被人所关注。Nature曾发表一项有近1500名研究者参与的调研结果，提及有超过70%人无法重复他人研究成果！其中生物试剂的质量问题是首要因素（占36.1%）。Science、Nature等国际顶尖杂志也都提到要重视抗体特异性问题。

科研者一旦发现自己所用的抗体存在非特异结合，则意味着之前所做的研究工作全都前功尽弃，必须推倒重来！验证抗体的特异性需要投入大量金钱和时间，验证过程更是需要非常严格的对照设计。我们将继续推进敲除验证项目，以期未来会有更多通过敲除验证的抗体提供给客户。其实我们最希望看到的是，不仅仅是Abcam，而是整个抗体供应行业都能够行动以来，关注抗体产品的质量隐患，减少因此而造成的科研资源浪费。

其实说这么多，总结到底是什么让Abcam取得今天的成就，我想对品质的追求是首要的，其次是对于服务的要求，对于科学家的理解，总体来说是因为我们一直站在科学家的角度上努力提供适合科学研究的最佳体验吧。

2015年开始Abcam英国总部计划每年验证一定数量的抗体，迄今为止已经有一千多个抗体通过了堪称业内最严格的抗体特异性验证——敲除验证（Knock-out Validation）。

我们目前有经过抗体敲除验证的产品约1000多种，种类在不断增加，代表产品入下：