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第一篇临床检验基础 第一单元血液样本采集和血涂片制备 第一节血液生理概要 血液的组成及生理功能（了解） 1．组成：血液由血细胞（红细胞、白细胞、血小板）和血浆组成。血清与血浆相比，血清缺少一部分凝血因子，如Ⅰ（纤维蛋白原）、Ⅱ（凝血酶原）、Ⅴ、Ⅷ等凝血因子。 2．血液性质： （1）血量：血浆占55%，血细胞占比45%。 （2）酸碱度：pH7.35～7.45。 （3）血浆渗透压：290～310mOsm（kg·H2O）。 （4）健康成年人全血黏度为生理盐水的4～5倍。 （5）比密：1.050～1.060，男性：1.055～1.063；女性：1.051～1.060。 3．生理功能：运输功能、协调功能、维护机体内环境稳定和防御功能。 4．血液特性：红细胞的悬浮稳定性、黏滞性、凝固性。 第二节采血方法和采血管选择（熟练掌握） 1．静脉采血法：成年人静脉采血常选肘部静脉（压脉带捆绑不超过1分钟）。 2．真空采血法：真空采血法是一种新的静脉采血法，又称负压采血法。真空采血装置有套筒式、头皮静脉式两种。 3．皮肤采血法：通常选择耳垂或手指部位。WHO推荐血常规检查采集左手无名指指端内侧血液，婴幼儿可选择大拇趾或足跟内外侧缘血液，严重烧伤患者可选择皮肤完整处。 4．方法评价：真空采血法是ICSH推荐的采血方法，也是临床常用的采血方法。 5．质量控制（了解） （1）患者：患者活动情况、精神状态、药物、年龄、性别、种族、样本采集时间、吸烟、季节等都会影响检测结果。 （2）采血：止血带结扎时间应小于1min。 （3）溶血：容器不洁、接触水、强力振荡、操作不慎等可引起溶血，使红细胞计数、血细胞比容、血浆或血清化学成分（如钾、镁、转氨酶、胆红素）等多项指标检验结果发生变化。 （4）样本处理：血液样本采集后应立即送检，并尽快进行检查，样本保存不当直接影响实验结果。 （5）实验结果分析：分析结果时，应考虑药物、饮食等因素对结果的影响。同时，应密切结合临床。 第三节抗凝剂选择 常见抗凝剂原理及其用途（掌握） 表1-1-2常用抗凝剂比较
第四节血液涂片制备 考点一、载玻片的清洁（掌握） 新载玻片常带有游离碱质，必须用约lmol/L HCl浸泡24h，清水冲洗，干燥后备用。用过的载玻片可用适量肥皂或其他洗涤剂煮沸20min，趁热刷去血膜，清水冲洗，必要时蒸馏水浸泡，干燥后备用。要保持载玻片的清洁、干燥、中性、无油腻。 考点二、血涂片的制备（熟练掌握） 1．手工推片法：涂片时，推片与载玻片保持25°～30°夹角。 2．厚血膜涂片法：临床上常用厚血膜法检查疟原虫与微丝蚴。 3．良好血涂片标准：厚薄适宜、头体尾分明、细胞分布均匀、血膜边缘整齐、两侧有一定空隙、血膜占玻片的2/3。 4．方法学评价：手工推片法用血量少、操作简单，是应用最广泛的方法。此外，疟原虫、微丝蚴等检查可采用厚血膜涂片法。 5．质量控制：血细胞比容增高，血液黏度较高时，应小血滴、小角度、慢推，反之亦然。新载玻片必须用1mol/L的盐酸清洗后才能使用。 第五节血液细胞染色 考点一、瑞氏染色（熟练掌握） 瑞氏染色是血涂片最常用、最经典的染色方法，对细胞质和颗粒染色效果好。 1．染液组成：碱性亚甲蓝、酸性伊红、甲醇（作为溶剂及固定细胞形态）。 2．原理：物理吸附和化学亲和作用。 3．染色效果：最适pH为6.4～6.8。若缓冲液偏酸，则红细胞和嗜酸性粒细胞偏红，细胞核呈淡蓝色或不着色。若缓冲液偏碱，细胞染色染成灰蓝色，颗粒深暗；嗜酸性粒细胞可染成暗褐色，甚至棕黑色；中性颗粒偏粗，染成紫黑色。 4．注意事项：（1）在距玻片另一端2cm处结束涂抹为宜；（2）血涂片上有染料颗粒沉积，可滴加甲醇，然后立即用流水冲洗；（3）染色过淡，可复染，复染时先加缓冲液再加染液；（4）新鲜配制的染液染色效果差，应贮存一段时间，时间越久，染色效果好。 考点二、吉姆萨染色（了解） 吉姆萨染色对细胞核和寄生虫着色较好。 1．染液组成：天青、伊红、甲醇、纯甘油。 2．原理：同瑞氏染色。 记忆方法：血红蛋白，嗜酸性颗粒（碱性蛋白质）：具有嗜酸性——伊红结合；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质（酸性蛋白质）：具有嗜碱性——亚甲蓝结合。 第二单元红细胞检测 第一节概要 考点一、红细胞生理（了解） 红细胞（RBC）是血液中数量最多的细胞成分，成熟RBC的平均寿命为120天、白细胞与血小板7～14天，衰老的RBC主要在脾破坏。 考点二、血红蛋白（了解） 血红蛋白分子是有核红细胞、网织红细胞内形成的一种含色素蛋白质。色素部分为亚铁血红素，蛋白质部分为珠蛋白。亚铁血红素由原卟啉、铁组成。血红蛋白的合成受红细胞生成素和雄激素的调节。 第二节红细胞计数 红细胞（RBC）计数（掌握） 1．红细胞计数常用稀释液 （1）Hayem稀释液：由NaCl（调节渗透压）、Na2SO4（提高比重防止细胞粘连）、HgCl2（防腐）和蒸馏水组成； （2）枸橼酸钠稀释液：由NaCl（调节渗透压）、枸橼酸钠（抗凝作用）、甲醛（防腐）及蒸馏水组成。 2．牛鲍计数板计数RBC （1）计数公式：红细胞/L＝N×25/5×10×200×106＝N（5个中方格的RBC总数）/100×1012。 （2）牛鲍计数板：中央5个中方格是红细胞和血小板计数区域，四角的4个大方格是白胞计数区域。 3．参考值：成年人：男性4.0～5.5×1012/L；女性3.5～5.0×1012/L；新生儿6～7×1012/L。 4．临床意义 （1）生理变化：①新生儿、精神刺激、剧烈运动、气压减低可导致红细胞增多；②妊娠期妇女和老年人红细胞常减低。 （2）病理变化：①急慢性失血、红细胞寿命缩短，造血原料不足，骨髓造血功能减退可引起贫血，造成红细胞（或血红蛋白）减少；②红细胞增多症、心血管疾病、肺部疾病、呕吐、严重腹泻、大面积烧伤以及某些药物均可引起RBC增多。 第三节血红蛋白测定 血红蛋白（Hb）测定（掌握） 1．检测原理 （1）氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法：血液中除硫化血红蛋白（SHb）外的各种Hb均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，在540nm处测定吸光度，再换算得到Hb的浓度。 （2）十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS）测定法：血液中SHb外的各种Hb均可与低浓度SDS形成棕红色化合物，在538nm处测定吸光度，再换算得到Hb的浓度。评价：HiCN是目前国际推荐的参考方法，致命缺点是氰化钾有剧毒，SDS是次选方法。 （3）血红蛋白成分：HbA：α2β2，占95%，含量最多；HbF：α2γ2，胎儿血红蛋白，占1%；HbA2：α2σ2，占2%～3%。 2．参考值：成年人：男性120～160g/L；女性110～150g/L。新生儿：170～200g/L。 3．临床意义：Hb和RBC临床意义相似，但在临床判断贫血程度上，Hb测定优于RBC计数。 4．HiCN法测定注意事项 （1）HiCN转化液应贮存在棕色有塞玻璃瓶中（不能用塑料瓶）； （2）氰化钾有剧毒，测定后的废液应收集于广口容器中，稀释后加次氯酸钠混匀，敞开容器放置15小时以上再排入下水道； （3）废液不能与酸性溶液混合，避免产生剧毒气体。 第四节红细胞形态检查 考点一、正常红细胞形态（掌握） 正常红细胞形态特点：双凹圆盘形，大小一致，平均直径7.2μm，呈淡粉红色，中央1/3为生理性淡染区，胞质无异常结构，无细胞核。大小改变：小红细胞直径＜6μm；大红细胞直径＞10μm；巨红细胞直径＞15μm。 考点二、红细胞形态改变常见疾病（掌握） 球形RBC：遗传性或获得性球形红细胞增多症。 镰形RBC：镰状细胞贫血。 棘RBC：遗传性β脂蛋白缺乏症、尿毒症。 裂RBC：弥散性血管内凝血、正常人（＜2%）。 有核RBC：溶血性贫血最常见。 靶形RBC：珠蛋白生成障碍性贫血、缺铁性贫血。 缗钱状RBC：多发性骨髓瘤（MM）。 口形RBC：遗传性口形红细胞增多症、酒精中毒，正常人（＜4%）。 泪滴形RBC：骨髓纤维化和正常人。 考点三、红细胞内结构异常（掌握） 1．嗜碱性点彩红细胞：细胞胞质内出现形态不一，大小不等的蓝色颗粒（残存变性嗜碱性RNA），常用于铅中毒的筛查指标。 2．豪焦小体（H-J）小体：又称染色质小体，是位于成熟或幼稚红细胞细胞质中的紫红色小体，已证实为核的残余物，见于脾切除后等疾病。 3．卡波环：紫红色细线圈状、呈环形或“8”字形，可能是核膜残余物、纺锤体残余物或脂蛋白变性所致，见于白血病、巨幼细胞性贫血等疾病。 第五节血细胞比容测定 血细胞比容（Hct）测定 1．参考值：温氏法：男性0.40～0.50；女性0.37～0.48。 （微量法为WHO推荐的常规方法；血液分析仪法：临床常用；ICSH定为参考方法：放射性核素法）。 2．温氏法操作要点：标本加入温氏管离心分5层：自上而下依次为血浆层、血小板层、白细胞层和有核红细胞层、还原红细胞层、带氧红细胞层。计算时读取还原红细胞层（紫黑红色）。 第六节红细胞平均指数 考点一、红细胞平均指数（掌握） 表1-2-1红细胞评价指数
考点二、贫血形态学分类及意义（掌握）
来源: 396学习网
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