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遇到新冠核酸实验室污染不要慌!请收下这 6 个处理方案

归去来兮 2022-12-14 380人围观 技术

大家在做核酸检测的时候,总会碰到实验室污染的情况,尤其是扩增产物的污染,清除的难度之大、对结果影响之深,简直让人崩溃。


实验室污染的严重性不言而喻,那么如何预防污染和及时清除污染呢?我根据我们实验室目前所遇到的情况,对实验室的污染进行了大体的分类并对清除措施进行简单说明。



01

待测标本导致的气溶胶污染

我们都知道,气溶胶是由空气与液体表面摩擦而产生的。剧烈的操作如开盖、晃动、加样器的反复抽吸等开放式操作,均可造成核酸气溶胶的污染。


所以,当我们检测的样本中含有强阳性的样本时,在开盖的瞬间,气溶胶扩散至操作平台的各个角落,或直接沉降到其他加样孔中,或者加完强阳性样本的核酸后,加样枪被气溶胶污染。


通常,气溶胶污染的扩增曲线图谱 Ct 值较大,整板反应曲线有部分翘尾,翘尾试验结果占比会越来越大。


处理方法:移除生物安全柜内的非必须物品,使用核酸去污剂对生物安全柜内进行喷洒(包括加样枪),15 ~ 20 分钟后,使用 75% 酒精洗去去污剂。预防措施:样本在震荡加样前,静止 10 ~ 15 分钟;加样枪应当使用带滤芯的枪头,遵循「慢吸快打」的原则。



02

阳性质控品的污染

❶ 很多实验室在做核酸检测时会使用试剂盒自带的阳性质控品,其成分大多是含有目的片段的质粒,实验人员在开盖的过程中,手套上可能沾有阳性质控的质粒,在加完核酸加盖八联排盖子时,可能会不慎将质粒带入反应管,造成污染。


处理方法:立即更换手套,对生物安全柜内进行消毒,推荐使用核酸去污剂进行喷洒台面,(不要使用次氯酸钠,具有腐蚀性),然后使用 75% 酒精对台面进行擦拭。


❷ 还有一种情况就是使用磁珠法进行核酸提取时,忘记插入磁套,造成质控品核酸污染。


这是由于未加磁套,提取的核酸会残留在磁棒上,再进行下一批次提取时,残留在磁棒上的核酸会混入样本的核酸中,造成结果异常。


处理方法:暂停使用该仪器,使用低浓度酒精对磁棒进行擦拭,最后用干净的纸巾将磁棒擦拭干净,关闭舱门,开启紫外线消杀。提取仪的维护保养需要专业的工程师来操作,所以遇到上述问题时,在进行了上述简单的处理后,最好还是通知工程师来进行专业的维护。



03

待检测样本的污染

❶ 这个大家比较熟悉,一种是待测新冠标本溢撒造成的污染。


处理方法:立即用吸水纸覆盖,并使用 0.55% 含氯消毒剂进行喷洒消毒。消毒液需要现用现配,24 小时内使用。


❷ 另一种是新冠样本倾覆造成的实验室污染。


处理方法:保持实验室空间密闭,避免污染物扩散。立即使用润湿有 0.55% 含氯消毒剂的毛巾覆盖污染区。必要时(如大量溢撒时)可用过氧乙酸加热熏蒸实验室,剂量为 2 g/m³,熏蒸过夜;或 20 g/L 过氧乙酸消毒液用气溶胶喷雾器喷雾,用量 8 mL/m³,作用 1 ~ 2 小时;必要时或用高锰酸钾 - 甲醛熏蒸:高锰酸钾 8 g/m³,放入耐热耐腐蚀容器(陶罐或玻璃容器),后加入甲醛(40%)10 mL/m³,熏蒸 4 小时以上。熏蒸时室内湿度 60% ~ 80%。



04

扩增产物造成的实验室污染

这是目前实验室最常见也最难消除的实验室污染,由于高频次的核酸检测,实验室人员在将扩增产物移出仪器时,不当的操作可能会造成反应管「爆盖」,通常一次典型的 PCR 扩增可以产生 109  拷贝的靶序列,如果气溶胶化,甚至最小的气溶胶都会含有 106 拷贝的扩增产物。如果不加以控制,在短期内累积的气溶胶化的扩增产物即会污染实验室中的试剂、仪器设备和通风系统,从而造成严重的实验室「污染」。通常,扩增产物污染大部分反应孔位或全部孔位会出现正常的扩增曲线,但会造成大量的假阳性结果。


扩增产物造成的污染

图源:作者拍摄


处理方法:那如何快速的清除由扩增产物引起的实验室污染呢?在《实时荧光 PCR 技术》(第二版)中给出了如下图所示的扩增产物解决办法,并对各种方法的优缺点进行了阐明:


图源:《实时荧光 PCR 技术》


然而,我们在实际的工作中对上述方法进行了试验比较,各方法都存在一定的缺陷,如紫外线照射效果不佳,尤其是新冠核酸检测 PCR 扩增产物引起的污染,通常新冠核酸检测的 PCR 扩增产物的片段 < 200 Kb,因此,紫外线照射的作用对扩增产物几乎无效。异补骨脂素方法对试验结果有影响,盐酸羟胺对人体的危害较大。我们实验室通过大量的试验总结了一套行之有效的清除扩增产物污染的方法,在这里分享给大家。


总的来说就是通风+核酸去污剂的使用。具体操作如下:首先关闭实验室所有门窗,将实验室各区全部进行核酸去污剂的喷洒(包括台面、空气、仪器表面等),15 ~ 20 分钟后,开窗通风,并使用 0.2% 含氯消毒剂进行台面擦拭,仪器表面使用 75% 的含氯酒精擦拭(部分仪器的屏幕使用的是有机玻璃,切勿使用酒精擦拭),再用清水洗去消毒液,去污操作完成后,进行核酸沉降试验与涂抹试验,如此反复试验,直至结果为阴性,可认为污染消除。


在不具备通风条件的实验室,更换不同品牌的扩增试剂也是一种常用的方法。





总之,核酸检测实验室想杜绝污染是不可能的,只有不断提高操作人员的专业素质,强化操作人员对于实验室污染的风险认知,才能效的减少实验室污染的频次,将实验室污染的概率降到最低。




参考资料:

1.《医疗机构新冠病毒核酸检测工作手册》(试行第二版)

2.《实时荧光 PCR 技术》(第二版)

来自: 丁香园检验时间 | 作者:陈磊
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