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生化结果遇到负值别慌:牢记这 5 个处理措施就够了!

归去来兮 2022-12-2 549人围观 技术

上班时,接到病房医生打来电话,他和声细语的说:「你好,这里是 XX 科,我们有个患者,病历号 XXX,他肝功的报告单上显示γ-谷氨酰转肽酶的结果是负值,您能给确定一下吗?」


听到这我有两个意外的地方,一个是我们报告单居然发出了一个负值的结果而审核人员没有发现;另一个是临床医生打电话的态度非常礼貌。别的不说,就冲他这个态度,我也得把这个负值结果好好研究一下。


根据患者的病历号,我很快找到了这份肝功结果,其中 γ-谷氨酰转肽酶(GGT)结果显示「- 19 U/L」,而结果提示没有「↓」,且背景也没变成代表偏低的蓝色。


仔细观察后发现,在「-」和「19」之间有一个空格,LIS 系统没有识别出这个 BUG,默认是一个正常的结果,而审核人员也没有仔细的核对每一个结果的数值就将结果发出。


为了弄清为什么会出现负值的结果,我将该项目反应曲线调出,发现在 1 点和 10 点之间,有一个吸光度异常升高的峰,按照之前进修的经验,我用聚乙二醇(PEG)6000 将样本处理之后复测,(具体方法可参考往期推文:一个尿酸负值结果,我从上海瑞金医院学会了「万能」解题思路!)反应曲线和结果均显示正常,于是将错误的报告撤回,补发新的报告单并通知临床医生。


世上本没有路,走的人多了也就成了路,以下把我遇到过的负值样本原因及处理措施进行一下总结分享:


01

不合格样本

 溶血


溶血样本对重氮盐法检测血清总胆红素有一个负向的干扰。


其原理有二:一是对反应过程的干扰。正常检测中,总胆红素与重氮盐试剂发生反应生成偶氮胆红素,呈紫红色,而血红蛋白与重氮试剂反应形成的产物可破坏偶氮胆红素,使总胆红素结果偏低。二是血红蛋白本身对反应体系中比色过程的干扰,氧合血红蛋白在 540 和 576 nm 处有两个的吸收峰,恰与总胆红素检测主波长 540 nm 重叠。


溶血对于生化检测结果的影响是多方面的,除了上述的干扰反应和比色之外,还有细胞,尤其是红细胞内物质的释放使血清中物质含量假性增高(如血钾),还有细胞破裂后释放的内容物对血清的稀释作用。


处理措施:对于溶血样本,应该在上机检测前即识别并拒收,否则不仅可能因再次复查浪费试剂,还有可能发出错误的结果。


 脂血


脂血样本中乳糜微粒增多,因其具有散光性的特点,可以使入射光产生散射,对比色法和比浊法产生严重的干扰,使得检测系统无法正确的检测反应体系的吸光度变化,从而得出错误的结果,甚至检测不出而得到负值。


图:脂血样本 sdLDL 反应曲线
图源:作者拍摄


图:正常样本 sdLDL 反应曲线
图源:作者拍摄


处理措施:对于脂血样本引起的负值,实验室最常用的排除干扰的方法是高速离心后取下清液进行检测。但需注意的是,高速离心法不能用于甘油三酯、胆固醇等脂类物质的检测,因乳糜微粒含有大量的甘油三酯和少量的胆固醇,离心后浮于上层,如果使用下清液检测必然会导致二者假性降低,故多用稀释法来排除。


❸ 样本管使用错误


此类样本多是由于采样人员用错采血管,将需用黄管或红管采集的样本采集到了紫管中,发现用错管后,又没有重新给患者抽血,而是将紫管中的样本直接倒进黄管送到检验科。


这种样本看似正常,其实紫管中的 EDTA 已经螯合了样本中的钙离子和镁离子,使得钙离子和镁离子浓度极低。此外,镁离子浓度降低还会抑制碱性磷酸酶的活性,使其检测结果也可能得到一个负值结果。


处理措施:对于此类结果在检验前是比较难以识别的,只有上机检测之后发现钙、镁、碱性磷酸酶结果异常低,钾离子(常用紫管使用 EDTA-K2 抗凝)异常高的结果,基本可以打电话询问采血人员是怎么回事了。


02

药物干扰

临床医生在临床诊疗过程中,为了预防患者的某些治疗反应而使用的药物,也会影响患者的生化结果,甚至出现负值,如拉布立酶。


拉布立酶是一种重组的尿酸氧化酶,主要用于预防恶性血液肿瘤患者在化疗初期肿瘤迅速溶解导致的高尿酸血症,其可将尿酸转换为尿囊素,使得血清中尿酸水平降低


将此类患者样本与正常患者样本混合后,按一定时间间隔分别检测尿酸浓度,再与理论浓度相比可以发现,实际检测浓度较理论浓度低,且随着时间推移会越来越低。


图源:文献截图


处理措施:所以,对于使用拉布立酶的患者,如需检测血清尿酸水平,应该在采样后立即 4 ℃ 冷藏送检,低温离心后立即上机检测,以抑制酶对尿酸的降解。


03

巨球蛋白血症

巨球蛋白血症(IgM)可以对多种检测项目有影响,我曾经遇到过两例,一例是尿酸,另一例就是 γ- 谷氨酰基转移酶,结果均为负值(均为贝克曼 AU5800 原装试剂)。


在处理过程中我们核对反应曲线发现,当仪器加入 R1 试剂和患者样本后,整个反应体系的吸光度骤然升高并一直持续到 R2 试剂的加入,但最终反应终点的吸光度可能还不如起点的吸光度高,导致仪器计算出错误的结果输出负值结果。


图:巨球蛋白导致反应体系加样后吸光度升高
图源:作者拍摄


此类结果通过反应曲线的判读可大体识别,另外可查看患者免疫球蛋白检测结果、血清蛋白电泳、免疫固定电泳的结果加以辅助。


处理措施:巨球蛋白血症引起的负值结果处理原则是降低或去除血清中大量的 IgM。可通过蒸馏水稀释,加入蒸馏水后大量的 IgM 互相聚集产生沉淀,通过高速离心取上清后可降低样本中的 IgM 浓度;如果稀释法无法排除干扰,可使用聚乙二醇与患者样本混匀后高速离心,此时 IgM 可被沉淀,但是此种方法应注意聚乙二醇使用的分子量和浓度,浓度过高亦会使其他蛋白质类产生沉淀造成假性降低。


结语


负值无论是在生化还是免疫检测中都是比较讨人厌的一类异常结果,其原因比较多,需要检测者对于此类结果有比较丰富的处理经验和能力,而对于报告单审核者而言,则需要打起十二分的精神,仔细核对每一个结果之后再发出报告,不要等到错误的结果发出,患者拿着带有负值的检验报告单来质问「我做个检查,怎么还倒欠你 19 个谷氨酰转移酶呢?」的时候再道歉。



参考文献:

[1] 孙虹,牛华,赵崇吉,等。胆红素、血红蛋白和乳糜微粒对生化检测结果的干扰评价 [J]. 国际检验医学杂志,2011,32 (21):2509-2512.

[2] 管华玲,吴健,王源,等。应用 EP7-A2 文件探讨溶血对重氮法测定总胆红素的干扰情况 [J]. 国际检验医学杂志,2015,36 (24):3525-3526+3529.

[3] 丘家杵,阮萍,雍军光,等。健康人血红蛋白紫外可见吸收光和 FTIR 光谱 [J]. 光谱学与光谱分析,2020,40 (05):1425-1430.

[4] 周晓娜,方宏罡,曹艳菲,等。尿酸酶 - 过氧化物酶偶联反应检测血清尿酸过程中的干扰分析 [J]. 诊断学理论与实践,2020,19 (04):426-429.

来自: 丁香园检验时间 | 作者:Doctor.7
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