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指南共识 | 感染性眼病的病原微生物实验室诊断专家共识

归去来兮 2022-3-25 376人围观 医学


摘要


感染性眼病是发展中国家重要致盲原因之一,病原微生物检查是感染性眼病诊断的金标准。由于眼部组织取材困难、标本量少,实验室诊断阳性率偏低,严重影响疾病的诊断和预后。我国大多数医疗机构感染性眼病实验室诊断能力不足,缺乏眼部微生物检测的标准化方法。为此,北京医学会检验分会组织专家和相关课题组通过讨论和临床验证,总结出适合我国眼科临床实践的病原学诊断路径,形成感染性眼病实验室诊断专家共识(通讯作者:首都医科大学附属北京同仁医院鲁辛辛教授、首都医科大学附属北京同仁医院梁庆丰教授。该共识从常见感染性眼病临床表现和送检指征入手,规范眼部标本采集、转运、质量评估的方法和流程;强调眼科医师应与微生物检验人员充分配合,正确选择适宜的微生物检测方法,提倡床旁接种,同时针对刮片细胞学检查、传统微生物培养、棘阿米巴培养以及核酸检测、宏基因组测序等技术提出建议。



常见病原体及送检指征


具体内容请点击链接:

感染性眼病的常见病原体及送检指征



标本采集及质量评估


01

标本采集及转运原则


02

标本质量评估


刮片标本评估

进行刮片细胞微生物学检查的标本,如分泌物、脓液或坏死组织应制成均匀薄层涂片,直径约10 mm。除玻璃体灌洗液需离心后取沉淀或甩片外,其余均应使用原始标本。

(1)组织标本评估:载玻片上肉眼可见分泌物、脓液或坏死组织薄层平铺,不形成组织细胞堆积。

(2)角膜刮片评估:角结膜病灶及周围脱落或炎性细胞数量须≥ 1级。


培养标本评估

包括标本采集前是否使用抗菌药物、抗菌药物种类及时间;采集方式、转运装置、采样量;是否床旁接种、是否在2 h内送达实验室;申请检查项目的适宜性等。由于不建议拒收标本,因此对评估不合格的标本需在结果报告中进行描述。



实验室检查


01

刮片细胞微生物学检查


姬姆萨染色


革兰染色

根据菌体形态(杆菌、球菌、球杆菌)、染色特性(阳性、阴性或不确定)、排列方式(成双、成堆或散在,短链或长链等)、白细胞吞噬等因素判断。


荧光染色

荧光染色可显著提高对真菌、微孢子虫和棘阿米巴诊断的敏感性。


抗酸染色及弱抗酸染色

抗酸染色可对结核分枝杆菌 、非结核分枝杆菌进行检测。疑似诺卡菌感染或微孢子虫可使用弱抗酸染色,菌体或虫体呈粉红色着染为阳性。


湿片法

生理盐水湿片法主要用于棘阿米巴滋养体和包囊的活体观察;KOH 湿片法也可用于丝状真菌的观察。


寄生虫检查

除棘阿米巴原虫外,常见眼部寄生虫还包括结膜吸吮线虫、睫毛的螨虫及阴虱。结膜吸吮线虫生长于结膜囊内,裂隙灯下可见白色线头样虫体蠕动,镊子取出光学显微镜下进行观察。螨虫位于睫毛毛囊内,光学显微镜下(100倍)寻找蠕形螨成虫、幼虫或虫卵。阴虱常生长于睫毛毛根及毛干,裂隙灯下剪除或拔取睫毛后光学显微镜下观察成虫及虫卵,容易诊断。


02

传统微生物培养


培养基

眼部微生物常规培养包括需氧、兼性厌氧、厌氧及真菌培养等,必要时可增加微需氧及分枝杆菌培养。


培养条件

生化培养箱适用于不同温度下生长的细菌及真菌的培养。


关于增菌

眼部感染标本不建议增菌;术中取材的房水、玻璃体液及角膜等可进行增菌。


微生物鉴定

基于菌落的生化试验、自动化仪器及 MALDI-TOF 质谱是目前常用的鉴定手段。必要时可选用 rDNA(16S、18S 或 28S)及 ITS/D1D2测序技术进行鉴定。


抗菌药物敏感实验

对外眼标本,除凝固酶阴性的葡萄球菌(非路邓葡萄球菌)和类白喉棒状杆菌外,对单一微生物纯培养或培养出2种优势病原体,需行鉴定和AST(金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌无论菌落多少,均应行鉴定和AST)。相较之下,内眼标本应作为无菌部位处理,任何培养阳性病原体皆需鉴定和AST。


03

棘阿米巴培养及鉴定


角膜棘阿米巴原虫的培养常规选择 Page 非营养琼脂培养基。


04

核酸检测


对常规培养阴性的标本,核酸检测成为诊断病毒性角膜炎、葡萄膜炎和视网膜炎的主要手段。利用实时定量PCR技术检测腺病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘带状疱疹病毒、EB病毒和弓形虫等病原微生物已在业界达成共识。


此外,可利用 16S rDNA 和 18S rDNA 测序技术提高检出率。


FISH 与 PNA 探针可快速检测眼内炎或角膜炎的常见细菌和真菌病原体。


对于眼部无菌标本,常规检验无法满足实验室诊断时,可选择宏基因组下一代测序技术(mNGS)。该技术的无偏倚性使其成为未知病原体识别的重要手段。有研究表明 mNGS 诊断眼内炎的敏感度为 88%,在鉴定未知低丰度微生物时,mNGS 灵敏度优于其他方法。但mNGS受标本量、标本处理、核酸提取、文库制备及测序深度的影响,结果的准确性和特异度有待临床进一步验证。非无菌部位眼科标本可检测出多种微生物,临床上难以判断其是否致病。尽管mNGS存在局限性,但目前仍是眼科难培养病原体的检测手段之一。


05

免疫学检测


继发于全身感染的视网膜炎或葡萄膜炎患者可进行血清学检查,如梅毒螺旋体、刚地弓形虫和伯氏疏螺旋体等的诊断。血清、房水、玻璃体液及泪囊分泌物均可进行病原体(包括疱疹病毒、巨细胞病毒、弓形虫、梅毒)特异性抗体和总 IgG 检测。



报告要求


眼科微生物检测报告包括标本信息、标本处理方法、质量评估及微生物检验(显微镜检查、微生物培养、鉴定和药敏实验)结果。



小结


眼科医生在申请检查项目前应全面评估眼部病变情况,根据临床拟诊选择染色及培养方法。如果出现刮/涂片结果与培养不一致时,实验室人员应及时与临床医生沟通。如果脓性标本培养阴性应考虑多种因素影响,如取材、转运方式、转运周期、抗生素使用、麻醉剂的影响、特殊病原体等。在此,强调眼科医师应与微生物检验人员充分配合,正确采集标本,提倡床旁接种。实验室应建立满足眼科病原体检验技术平台,除传统培养外应具备核酸、抗体和特殊染色的检测方法,补充病毒、非典型病原体及寄生虫等检查内容。常用抗菌药物敏感试验折点并不适合眼科局部用药,多数情况仍需依靠医生经验或结合当地流行病学数据。


参考文献:

感染性眼病的病原微生物实验室诊断专家共识,中华检验医学杂志 2022 年1 月第 45 卷第 1 期 Chin J Lab Med, January 2022, Vol. 45, No. 1


来自: 唯菌论
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