找回密码
 立即注册

QQ登录

只需一步,快速开始

  • QQ空间
  • 回复
  • 收藏

新冠核酸检测异常扩增曲线如何处理?!这 5 种诡异曲线需警惕 ...

归去来兮 2022-1-13 32人围观 技术

作者:赵桂梅
单位:中国人民解放军联勤保障部队第 910 医院

作为一名核酸检验人,每天的工作少不了对扩增结果进行分析。对于新冠检测我们最喜欢看到的结果一定是阳性质控在靶基因通道内的预计循环数中呈现美好的 S 型曲线,阴性质控各通道无曲线(有些品牌试剂可有内参曲线),而标本仅在内参通道出现典型的 S 型曲线。

但实际工作中,结果并非次次尽如人意。这其中真正可疑的结果(疑似阳性标本)其实不多,而且疑似曲线往往很典型,通过复查排除就行了;真正让我们头痛的是一些很诡异的曲线。之前看到不少关于异常扩增曲线的分析介绍,类似内容今天就不再重复,本人仅就本实验室出现过的几种异常曲线和大家一起交流分享:




异常曲线 1



 某孔三个通道都早早出现往上爬坡的斜直线或曲线,如下图 1 和图 2:

图 1

图 2

原因分析:

(1)八连管密封不严,液面挥发严重;
(2)扩增试剂分液不均,孔内液面明显低于其它孔;
(3)图 2 中最先抬头的曲线可能是存在大气泡。

解决方案:

复查,注意检查八连管密封性,液面是否均匀,是否有气泡。



异常曲线 2



所有样本的某 1 个或 2 个通道出现均匀一致的翘尾,如下图 3:

图 3

原因分析:

扩增仪与扩增试剂不配套(如罗氏 cobasz480 扩增仪与金豪扩增试剂),未进行荧光补偿;

解决方案:

进行补偿实验,选用补偿程序文件分析数据,得到理想结果。如下图 4:

图 4



异常曲线 3


 
某些孔 1 个或 2 个靶基因通道的扩增曲线都出现先下降,后慢慢上抬的斜形直线,系统自动分析结果都有 ct 值(一般值较高),但复查后均为阴性。如下图 5:

图 5

原因分析:

(1)扩增试剂,即预混液配完放置太久;
(2)扩增仪进样仓的模块孔内可能有灰尘杂质之类的附着物干扰体系。

解决方案:

(1)试剂配完后尽快使用;
(2)用干净的棉签清洁扩增仪进样仓模块的孔壁。



异常曲线 4


 
样本基线水平不一致,变异幅度大(正常情况见图 4)。如下图 6:

图 6

原因分析:

(1)核酸提取纯度不高,杂蛋白及其他杂质随模板进入体系;
(2)扩增试剂,即预混液性能未达到最佳状态,如混匀,复温不充分,以及预混液曝光和室温放置太久;
(3)扩增仪光学透镜清洁度变差。

解决方案:

(1)排除提取仪故障或提取试剂问题,重新提取;
(2)扩增体系配制时需充分复温并混匀反应液及酶液,配完尽快使用或暂存冷藏冰箱;
(3)请仪器厂家专业人士对扩增仪进行清洁保养。



异常曲线 5


 
某孔三个通道均出现异常倒置的高峰。如下图 7:

图 7

原因分析:

(1)可能为仪器电压不稳,光源照射在此孔的光线故障;
(2)扩增仪光学透镜清洁度变差。

解决方案:

此类情况很少见,我们实验室也只碰到过一次,复查后恢复正常。如果经常出现,则需找仪器厂家专业人士对扩增仪进行维修保养。


以上是本实验室中遇到过的异常曲线,复查后基本都正常。即标本没问题,问题出在了仪器试剂耗材上。可见平时对仪器(包括提取仪和扩增仪)的定期校准维护保养、试剂耗材的选择、使用还是很重要的,这也是核酸检测质量控制的重要环节。做好了不一定事半功倍,但做不好一定会事倍功半!



来自: 检验时间
我有话说......