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方法多?诊断难?Xpert MTB/RIF实现结核分枝杆菌的精准快检

归去来兮 2021-11-10 84人围观 技术


作者:沈佳瑾  周春妹
单位:复旦大学附属中山医院检验科

结核分枝杆菌
结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis,MTB),俗称结核杆菌(Tubercle bacillus),其感染是威胁人类健康的公共卫生问题之一。结核病的早期确诊是患者得到及时救治以及减少MTB传播的重要基础。




实验室检查在结核病确诊中发挥关键作用,尽管针对MTB的实验室检查种类较多又各有所长,但有时依然难以明确诊断。下文就是这样一个肺结核疑似患者的确诊之旅。


案例经过



该患者同时送检了痰抗酸涂片、痰分枝杆菌液体培养以及全血T-SPOT.TB检测。结果如下:

  • 1. 痰涂片未见抗酸杆菌。

  • 2. 痰分枝杆菌液体培养第7天报阳。

阳性培养物在液体培养管(MGIT 960)内呈颗粒状(图1左),符合分枝杆菌的生长特点;阳性培养物的抗酸染色镜检呈现条索状(图1右),提示MTB可能性大。

图 1:患者阳性培养物外观及抗酸染色镜检

为了进一步鉴别阳性培养物里是MTB还是非结核分枝杆菌(Nontuberculosis mycobacteria,NTM),我们使用了结核分枝杆菌抗原检测试剂盒(胶体金法)。该试剂盒可检测MTB生长繁殖过程中所分泌的特异性蛋白质MPB64,用于区分MTB和NTM。该标本两次MTB抗原检测结果均为阴性。

  • 3. T-SPOT.TB检测结果阳性。

ESAT-6(抗原A)85、CEP-10(抗原B)62(参考值:抗原A<6、抗原B<6),提示MTB感染。

综合上述检测结果:阳性培养物的抗酸染色镜检形态以及T-SPOT.TB检测结果均提示MTB感染,但MTB抗原检测却是阴性。面对这种多项检测结果不一致的情况,我们是否可以根据抗原检测结果判读为NTM,还是要做进一步检测?


案例分析



我们首先通过查阅资料,发现MTB抗原检测(胶体金法)在以下情况中会出现假阴性:1.样本中MPB64浓度低于试剂盒检出限;2.牛分枝杆菌(M.bovis) BCG的几种亚株不产生MPB64蛋白;3.MPB64编码基因突变[1]。这虽能对MTB抗原检测阴性的结果做出解释,但依然不能确定阳性培养物菌体是否为MTB。还能再增加什么检测项目做进一步确认呢?

最后,我们建议该患者增加MTB核酸检测——Xpert MTB/RIF检测,阳性培养物和患者痰液样本结果显示为阳性(图 2)。

图 2:患者痰液样本的Xpert MTB/RIF 检测结果

这与临床同份痰液样本的二代测序(mNGS)结果(图 3)一致,检出结核分枝杆菌复合群的核酸序列而未检出NTM的核酸序列。结合患者的临床表现和影像学检查结果,最终该患者被诊断为结核病。

图3: 患者同份样本的二代测序结果


什么是Xpert MTB/RIF检测?



Xpert MTB/RIF是通过检测MTB基因组中的rpoB基因及其突变情况,实现MTB核酸和利福平耐药检测的半巢式全自动实时荧光定量核酸扩增技术。该技术具有以下优势:

  • 特异性好

特异性近100%[2],能准确区分MTB和NTM。

  • 灵敏度高

敏感性约53.54%[2],比涂片法和培养法更敏感。

  • 检测快速

完成检测仅需2小时。相比液体培养法耗时3~45天以及mNGS耗时约30小时,能有效缩短检测时间。

  • 适用广泛

痰液、肺泡灌洗液、肺组织、脑脊液、淋巴结、关节液以及尿液等均可用于检测。

  • 同时检测利福平耐药

检测对一线抗结核药物利福平的耐药情况,敏感性约97.6%,特异性约98.1%[3],可及时为临床用药提供有效参考。


MTB核酸检测助力结核病诊断



病原微生物学检测是确诊结核病的重要依据,传统的病原微生物学检测包括涂片法和培养法。涂片法价格低廉、操作简单,但敏感性差;培养法是结核病诊断的金标准,但由于检测周期过长,不能为临床提供有时效性的检测结果。而MTB核酸检测作为一种分子生物学技术,能够在一定程度上弥补传统检测方法的不足。

图 4:MTB多种病原微生物学检测方法的优缺点

在2017年发布的《中华人民共和国卫生行业标准——肺结核诊断》中[4],将MTB核酸检测阳性及肺部影像学检查支持纳入肺结核的诊断标准,这是对核酸检测在肺结核诊断中应用价值的高度认可。作为MTB核酸检测的方法之一,Xpert MTB/RIF被世界卫生组织(World Health Organization,WHO)推荐应用于肺结核、肺外结核及儿童结核的诊断[5]


随着分子生物学的发展,核酸检测技术在病原学诊断和耐药性检测中应用广泛。Xpert MTB/RIF在检测MTB感染中具有精准快速的突出优势,能够为临床医生诊疗结核病提供强有力的支持。

【参考文献】


来自: 检验医学网
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