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血型鉴定如何排除获得性类 B 抗原?

归去来兮 2021-3-22 97人围观 技术

单位:开封市中心医院


输血科的小伙伴们,当血型鉴定中遇到 ABO 正反定型不合时,大家的第一反应是不是以正定型为准?那你听说过类 B 抗原吗?


类 B 抗原是因肿瘤或细菌感染等因素影响,使红细胞上暂时出现的一种能与特定单克隆抗 - B 试剂反应的物质,会随病情好转而消失;在正常人群中也有报道,但不会消失,起因不详。类 B 抗原能将 A 型血的正定型「变」为 AB 型,O 型血的正定型变为 B 型,尤其对于「A」型变「AB」型的血样,若恰好是来自因高龄或免疫缺陷等因素导致血浆免疫球蛋白低下甚至缺失的患者,你可能连正反定型不合都发现不了,就十分自信地将该患者血型定为 AB 型了,后续输入 AB 型血(血浆制品和血小板除外),该患者极有可能会发生严重的溶血性输血反应。


在实际工作中,类 B 抗原筛查手段有酸化法、半乳糖胺法、血型基因检测、唾液血型物质测定、吸收放散试验、家系调查等,多步骤繁琐,用时较长,某些甚至需要特殊仪器和设备,在基层医院不容易实现,对于紧急用血的急危患者十分不利。笔者最近遇到一例检出类 B 抗原的病例,和大家分享如下。



病例简介


内科患者刘 X X,女,59 岁,无输血及骨髓移植史,因腹痛、腹胀、呕吐收治入院,入院时消瘦,呈贫血营养不良貌,血红蛋白为 75g/L,总蛋白为 47.4g/L, 白蛋白为 22.3g/L,且因呕吐导致电解质紊乱,钾、钠、氯均有不同程度的下降,鉴于患者的身体状况及年龄因素,先行按「肠梗阻」保守治疗,但效果不佳,检测肿瘤标志物,其中 CA125 竟高达 62.42U/ml,临床会诊决定待患者情况稳定后,对其行手术剖腹探查。

 


血型鉴定


01 试管法血型鉴定


术前主治大夫为该患者申请去白细胞悬浮红细胞 2U 纠正贫血,抽取 EDTA 抗凝静脉血 5ml 随输血申请单一并送至输血科,该患者从未验过血型,此次检测结果如下:


表一 患者血型血清学结果


如下图所示,若不镜检,仅凭肉眼判断,很容易就将血型误定为「AB」型。


图一 试管法血型结果

                 

图二 反定型侧与 B 型试剂红细胞凝集镜下图          

 

02 排除各种干扰因素


通知临床重新抽取血样并再次检测 ABO 血型,结果不变。所用试剂均在效期且并未受到污染。


将反定型侧血浆量加倍并放至 4℃冰箱反应 30min,与 B 型试剂红细胞的反应强度由 ± 转为 2+,与 A 型和 O 型试剂红细胞仍不凝集,说明该患者血浆中不存在冷凝集素,且存在抗 —B 抗体。


取 10 份 AB 型血浆,分别与该患者用 37℃生理盐水洗涤 3 次后的红细胞于 4℃冰箱反应 30min,结果均不凝集,自身对照也不凝集,可排除红细胞上的 T 抗原激活后引起的 T 凝集等多凝集现象。


患者洗涤后的红细胞再次做正定型,仍为 AB 型,且不规则抗体阴性,直抗阴性,血浆与 O 型试剂红细胞不凝集,可排除不规则抗体和自身抗体引起的正定型假性凝集,说明该标本红细胞上很可能同时存在 A 抗原和 B 抗原。


03 固相法血型鉴定


采用英科新创(厦门)科技有限公司生产的 ABO 血型正定型及 RhD 血型定型试剂盒(固相法)重新复检血型,结果为「A」型 RhD 阳性,与试管法的反定型一致。疑似试管法受到了类 B 抗原的干扰。


图三 固相法血型鉴定结果 

          

04 确定类 B 抗原的存在


①徐爽研究报道,如果正定型测定为「AB」型,反定型检测出患者血清中含有抗 - B,这种正反定型不合的现象可提示具有获得性类 B 抗原。


② Beck 等曾报告了 ES4 克隆配制的单克隆抗 —B 试剂与获得性类 B 抗原的反应受 PH 值的影响,在 PH 值≤6 时不反应,在 PH 值为 7.1 时反应强烈。根据此特征,将患者的红细胞生理盐水悬液用 0.1mol/L 的 HCL 调至 PH6.0 以后,再次用试管法做血型鉴定,结果正反定型均为 A 型,进一步验证了类 B 抗原的存在。



输血处理


取 A 型去白细胞红细胞悬液 2U 采用凝聚胺法交叉配血,主次端均无凝集,输血后患者无任何不良反应,次日复查血常规,贫血状态得到了一定纠正,血红蛋白从原来的 75g/L 上升到了 90g/L,后续近一个月左右,该患者又陆续输入共计 800ml A 型血浆,次端配血均无异常,输血后患者无输血反应,从侧面也验证了类 B 抗原并非与所有的抗 - B 抗体都反应,比如输入的 800ml A 型血浆中的抗 - B 抗体及自身血浆中的抗 - B 抗体。



讨论


目前的观点是,类 B 抗原是因某些肿瘤或革兰阴性杆菌的感染,导致红细胞上暂时出现的一种能与抗 - B 试剂反应的物质,服用某些药物、血液标本受到污染、某些健康人群等也有存在类 B 抗原的报道。很显然本例患者为肿瘤导致的红细胞上出现类 B 抗原。


固相法血型鉴定的原理根据抗原抗体的免疫吸附原理,将抗 - A,抗 - B,抗 - D 单克隆抗体分别固定在多孔固相载体上,当待测样本中的红细胞与固相抗体发生免疫结合反应时,红细胞即被截留在载体上,显示为红色,为阳性反应;如果无抗原抗体反应,红细胞则不能被截留,显示为无色,为阴性反应。


本实验试管法血型鉴定所用的血型试剂也为单克隆抗体,至于为何同样是单克隆抗体,固相法血型试剂却不受类 B 抗原的干扰,本文认为可能有以下原因:

①类 B 抗原与抗 - B 抗体的结合比较疏松,这点通过吸收放散实验已得到过证明,使用固相法血型卡时,冲洗液在固相载体上的流动破坏了这一不稳定的结合,使携带有类 B 抗原的红细胞从固化的抗 —B 抗体上解离下来。

②类 B 抗原与抗 - B 抗体的反应较正常的抗原抗体反应用时要长,在二者还未完全结合时,冲洗液就已经将红细胞从抗体区冲走了。

③试管法使用的单克隆抗 - B 与固相法所用的单克隆抗 - B 针对的 B 抗原表位不一样,即固相法的抗 - B 抗体与类 B 抗原不反应。


通过此病例的学习,我们得到的经验教训是:

第一,血型鉴定一定要镜检,比如凝集程度为 ±、mf 的,仅凭肉眼观察很容易判定为阴性。

第二,遇到疑难血型要大胆推测,小心求证,对于不能断定血型的病人,尽量避免输血,紧急情况下可输入 O 型洗涤红细胞或 AB 型血浆。

第三,对于血型鉴定为「AB」型的标本,尤其要注意血清中是否有弱抗 - B 抗体的存在,可采取将反定型侧放至 4℃冰箱延长反应时间或者增加血浆(抗体)量来排除。对于正定型为「B」型的标本,如果反定型侧 A 细胞有明显凝集,则可基本排除类 B 抗原的存在。

第四,固相法试剂能排除类 B 抗原的干扰,但在实际工作中,两种方法都有各自的局限性,应结合使用,且不能忽略正反定型对照。


在排除了骨髓移植、异型输血、红细胞多凝集等干扰因素的前提下,如果血型鉴定正定型为 AB 型,反定型为 A 型,那么该患者血型很可能为 A 型,携带了类 B 抗原;同样,如果正定型为 B 型,反定型为 O 型,那么真实血型很可能为 O 型,携带了 类 B 抗原。即携带类 B 抗原的标本,血型鉴定应以反定型为准。



参考文献

[1]. 徐爽。单克隆抗 —B 试剂与获得性类 B 抗原反应可行性的新进展 [J]. 中国输血杂志,2000, 13 (4): 279-279

[2].Beck ML,Korth J,Judd WJ.High incidence of acguired-B de-tectable by monoclonal anti-B reagents(abstract). Transfusion,1992,32(Suppl):17S

[3]. 林敏。急性胃粘膜病变引起类 B 抗原 1 例 [J]. 空军医高专学报,1995, 17 (3): 196-197

[4]. 章昊,喻琼,苏宇清,等。反定型 A 型试剂细胞中获得性类 B 抗原原因分析 [J]. 中国输血杂志,2009, 22 (5): 391-393

[5]. 孙振秀,于仁波。获得性类 B 抗原(类 B 抗原)致血型鉴定困难 1 例 [J]. 中国输血杂志,2003, 16 (5): 347-347

[6]. 侯涛,朱培元,严京梅,等。固相法血型定型试剂的研制及准确性评估 [J]. 临床误诊误治,2013, 26 (10): 96-98


来自: 检验时间 | 作者:高瑞、刘雪娇
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