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流感病毒检测方法大汇总

归去来兮 2020-10-30 71人围观 技术


建立科学、快速流感病毒的流感方法非常重要!



流感病毒在病毒分类学上属于正黏病毒科,其遗传物质由8个大小不等的独立单股负链RNA片段组成,共编码10个蛋白。其特点是容易发生变异。分为甲乙丙三型,其中甲型流感病毒经常发生抗原变异,可感染人和多种动物,常引起大流行和中小流行;乙型流感病毒变异较少,可感染人类,引起爆发或小流行;丙型较稳定,可感染人类,多为散发病例。


目前流感病毒在世界时有暴发流行,因此建立科学快速的诊断方法显得尤其重要!



图1:透射电镜下的流感病毒(175000X)


目前流感病毒的常用检测方法检测方法主要有病毒分离鉴定、血清学方法和分子生物学方法。


病毒的分离鉴定


病毒分离是流感病毒检测的传统方法之一,包括鸡胚接种和细胞培养。目前分离流感病毒主要应用马达犬肾细胞(MDCK)为宿主系统。流感病毒的检测时间一般需要4-5天。


免疫学检测方法


1. 血清学诊断


主要是检测患者血清中的抗体水平,即用已知的流感病毒抗原来检测血清中的抗体。血清抗体检测方法不能在感染初期抗体还未产生或低于检测浓度时进行检测。


2. 抗原检测


病毒抗原的检测的方法主要有两类:直接荧光抗体检测和免疫胶体金层析方法。直接荧光抗体检测方法是应用荧光色素标记抗体分子后,再与标本中特异性抗原结合,用荧光显微镜观察细胞中的病毒抗原及其存在的位置。免疫胶体金层析技术具有操作简便,无需任何专用仪器;检测结果直观,方便基层单位和现场使用。


病毒核酸检测


常用的方法有核酸杂交、逆转录一聚合酶链反应、多重逆转录一聚合酶链反应、酶联免疫PCR、实时定量。PCR、依赖性核酸序列扩增、荧光PCR等方法。近年来,应用基因芯片对流感病毒进行检测和分型是研究的一大热点,可以同时检测多种病毒,尤其适用于流感多亚型、易变异的特点。但这种方法对实验条件要求较高,核酸检测的普遍优点在于具有检测速度快、特异性强、易于操作的特点。



参考资料:

1:陆慧君,贺文琦,邓旭明等。流感的实验室诊断方法[J].动物医学进展,2005,26(5):105-109

2:Lau LT, et al. Nucleic acid sequence-based amplification methods to detect avian influenza virus. Biochem Biophys Res Commun. 2004;313(2):336-42.

3:夏骏,邓菲,胡志红等。用液相芯片方法检测禽流感病毒H5N1亚型的研究。检验医学,2009,24(9):682-687.

来自: 检验医学新媒体
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