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生化分析仪检测项目,为什么要按照这个顺序?

归去来兮 2024-6-13 05:40 PM 200人围观 医学


目前,实验室使用的全自动生化分析仪(Automatic biochemical analyzer,ABA)具有检验速度快、标本用量少等诸多优点,但同样存在一些缺陷,如交叉污染。交叉污染(也称携带污染)是 ABA 在样品检测过程中常见的问题,据文献报道,生化项目间试剂的携带污染率最高可达 300.0%。


污染物可以按耗材(如,样品、稀释剂、试剂、反应混合物和洗涤液)或残留部位(如,样品杯、样品探头、试剂探针和洗涤站)进行分类。研究发现,在实践中观察到以下类型的残留:1)样品探针中的样品残留;2)从稀释剂到样品杯中样品的残留;3)从一个反应混合物到另一个反应混合物的残留;4)从试剂到试剂探针的反应混合物的残留。


这些均会造成某个检测项目对随后的一个或数个项目检测的污染。另外,随着使用年限增长,仪器和零件的损耗,污染现象会加剧,样品检测的准确性和重复性也会随之降低。因此,对于全自动生化分析仪检测来说,避免交叉污染是重中之重。


01

ABA 中常见的试剂交叉污染


01 葡萄糖和尿酸与无机磷


无机磷试剂主要是采用磷钼酸盐复合物直接分析法,反应生成的未还原磷钼酸盐复合物与样本中的磷含量成正比,而葡萄糖和尿酸检测试剂均采用磷酸盐缓冲液作为试剂缓冲液,如果先测定含有磷酸盐缓冲液的项目再测定无机磷,所测结果将偏高,且干扰程度与磷酸盐缓冲液的浓度成正比。因此测试时,需要将试剂中含有磷酸盐缓冲液的项目放在无机磷项目后面。


02 尿素与谷氨酸脱氢酶


尿素测定一般采用尿素酶-谷氨酸脱氢酶法,其检测试剂中本就含有谷氨酸脱氢酶(GLDH),如先测定尿素再测定 GLDH,可使结果偏高。


03 甘油三酯与血清镁


甘油三酯检测试剂盒中主要组成成分之一为镁(Mg2+),如先测定甘油三酯再测定血清镁,可使镁检测结果偏高。此外,其他许多含镁的试剂如淀粉酶、肌酸激酶、碱性磷酸酶、二氧化碳等直接污染也可以影响镁的测定。


04 总胆固醇和甘油三酯与总胆汁酸


总胆固醇和甘油三酯检测试剂都含有高浓度的胆酸盐,检测时试剂的用量通常为 300 微升左右,而测定总胆汁酸用的血清所需微量(一般 < 10 uL),如果试剂针冲洗不干净,即使有极微量残余也可以对总胆汁酸的测定造成影响。


05 腺苷脱氨酶与血钾


ADA 试剂中含有高浓度的 K+,如试剂针或搅拌棒未彻底清洗干净,会将 K+ 带到血钾测定的反应体系中影响血钾的测定结果,使测定结果偏高。此外,葡萄糖、总蛋白与酸性磷酸酶试剂中也含有较高浓度的钾离子,也干扰血钾检测。


06 肌酸激酶与血清胆固醇值


据研究报道,在肌酸激酶(CK)后测定血清胆固醇值可显著降低(≤ 100 mg/dL),这是由于 CK 试剂的一种成分干扰了胆固醇测试过程。


在胆固醇测试过程中,会产生过氧化氢(H2O2),这种 H2O2 在 505 nm 处将 4-氨基安替比林和苯酚氧化转化为红色的醌-亚胺染料,与胆固醇浓度成正比。CK 试剂含有 N-乙酰半胱氨酸,可作为活性氧的清除剂,并使羟基自由基、超氧化物和 H2O2 失活,将含有 N-乙酰半胱氨酸的 CK 试剂带入胆固醇测定中,会分解反应过程中释放的 H2O2,从而降低胆固醇水平。


07 甘油三酯与脂肪酶


研究发现,在部分样品中发现脂肪酶高于正常淀粉酶(> 500 IU/L)。然而,立即重新检测这些样品的脂肪酶则显示正常脂肪酶水平(< 80 IU/L)。经查发现所有测定甘油三酯(TG)的样品,立即测定脂肪酶,结果显示脂肪酶值升高(> 500 IU/L),此为试剂残留引起的脂肪酶假性升高。


图 1 甘油三酯试剂对脂肪酶测定的影响


甘油三酯(TG)测试过程中,在第一个反应中,TG 被脂肪酶水解成甘油和三种脂肪酸。甘油在甘油激酶催化下,产生甘油-3-磷酸。上述 TG 试剂中使用的脂肪酶,如果未从探针和比色杯中完全洗出,则会严重干扰脂肪酶分析。如果在 TG 测试后立即进行脂肪酶分析,则会发生这种干扰。且研究发现,脂肪酶值的误差频率与 TG 水平无关,在 TG 的高、低或正常水平之间,该发作的频率没有显著差异。


08 总蛋白与镁离子


总蛋白试剂不含镁,但含有较高浓度的硫酸铜成分,铜离子与二甲苯胺蓝的发生显色反应干扰镁的检测结果。由于总蛋白与镁的测定多为单试剂法,残留的总蛋白试剂可通过 R1 试剂探针的携带干扰镁离子的结果。


09 ALT 和 AST 与乳酸脱氢酶


ALT、AST 多使用 IFCC 速率法,其试剂中含有高活力 LDH 成分,有可能会对 LDH 的测定带来干扰,使结果偏高。


10 淀粉酶与 Ca2+


淀粉酶试剂中含有较高浓度的钙离子,会使血钙检测结果升高。


11 pH 值的干扰


大多数酶反应 pH 值在 6.0~7.5 之间,而双缩脲法测血清总蛋白,反应需在碱性条件下(pH 值在 8~9)。若因交叉污染使下一反应的 pH 值改变,将对项目产生影响。


12 其他试剂污染


Mg2+ 测定试剂的络合剂能与铁结合,影响铁与铁络合剂的结合;直接胆红素试剂含有 EDTA,Mg 试剂中含有 EGTA(钙离子螯合剂),均能与 Ca2+ 结合,从而影响 Ca2+ 的测定;总胆固醇试剂中含有胆固醇酯酶,可水解胆固醇酯形成游离胆固醇,而引起对游离胆固醇测定的干扰等等。


02

如何消除试剂间交叉污染?

01 设置更完善的清洗程序


交叉污染确认之后,首先设置清洗程序,按照疑似交叉污染确认方法判断清洗效果。首先水清洗,无效的改为碱洗;如果碱洗无效,改为酸洗。也可根据污染物类型选择洗液,酸性洗液通常用于 Cu2+Ca2+、Mg2+ 等污染;碱性洗液可针对酶类干扰。酸碱清洗均无效时,建议更换管道。


另外,还可以对单个项目设置特殊清洗程序,如 HbA1C 每日样本量 > 100 份时可执行特殊清洗,以防交叉污染。


02 调整项目测定顺序


清洗之后如果没有改善,需调整实验项目顺序,将相互干扰的项目分开的同时,考虑方法学等方面的因素,如对 pH 要求较高的酶类检测项目,调整项目顺序将反应时 pH 接近的项目放在一起,避免交叉污染及节省时间。



另外,在两者之间插入非干扰项目,或将被污染项目放至污染项目前解决,使得测定的结果与单测该项目时无显著性差异,从而解决交叉污染的问题。但在插入非干扰项目之前应先检测携带污染的持续性,从而确定应插入的非干扰项目的项目数。


03 加强仪器的维护与保养


日常工作中一定要注意加强仪器的维护及保养,使用原装的碱性清洗液,定期清洗比色杯、加样针、搅拌棒等,保持仪器的管路清洁,同时也要关注探针、搅拌棒表面的黏附材料是否脱落,是否存在不光滑、不均匀等情况;关注搅拌棒位置是否正确,有无搅拌溅出等异常情况,有无比色杯废液残留;在更换不同方法的新试剂时应进行携带污染评估,减少或避免携带污染的发生。在仪器携带污染频次增加,排查困难时,应当尽快更换探针、搅拌棒、比色杯、管道等配件。



科学审核:副主任技师 邢继成
东部战区总医院秦淮院区检验科

参考文献(上下滑动查看)

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来源: 丁香园检验时间
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