【冯仁丰】实施C-反应蛋白检测计量溯源性：JCTLM工作组的共识总结 ...

JCTLM保留的数据库，近期列出了二级可互换有证参考物质（CRM）ERM DA-474/IFCC (DA-474) “人血清C-反应蛋白”，和两个通用免疫检测为基础的方法原理（免疫透射和免疫散射），作为实施C-反应蛋白（CRP）检测计量溯源性的基础。DA-474认可报告说明，它的值是由6个市售免疫检测程序产品设定，每一个均使用了ERM DA-470为校准品^[1]。

对ERM-DA-470设定的值可溯源到CRP的1st 国际标准，这是WHO的WHO 85/506, 叙述在证书报告中。该WHO 85/506标准在1985年制备，每个安瓿内含有冷冻干燥后溶液的人CRP为50 μg（在0.5 ml健康个体的混合人血清内）^[2]。制备的一级校准品作为WHO 85/506的溶液，与临床样品的互换性不清楚。

近期可用的市售终端用户免疫检测产品的校准等级，是依据DA-474二级可互换CRP或使用它的前身ERM DA-472/IFCC，用作较高等级计量溯源性的参考，遵循ISO 17511^[3]。用于产生CRM的ERM系列，说明CRP是五聚体形式^[4,5]。近期，CRP免疫检测的计量溯源性，已经被一个代表性个数的终端用户检测程序检测的临床样品结果间，产生了临床上拟合目的的一致性^[6]。两个二级可互换CRM已经保持了这个持续的良好性能15年了。

从计量溯源性观点上，要求的目标是具有一个校准等级，包括一个一级纯物质CRM，和一个为该被测量的较高等级参考检测程序（RMP），可在很长时间区间内，并在全球的任何地方，能够持续可反复的计量溯源性。形成这些较高等级参考对CRP是一个挑战，因为在临床血液样品中CRP的循环形式，它是一个复杂蛋白，表现为等同亚单位的五聚体 ^[7]。所以，临床上关联的被测量是血液中血清或血浆中的五聚体CRP，在医学实验室使用的终端用户免疫检测产品，，被指定去优先检测五聚体，不与单体反应。

CRP被测量的复杂性，意即为CRP形成较高等级RMP，必须相应地检测该五聚体的被测量，以拟合免疫检测中校准等级的目的。依据质谱的较高等级RMP，消化了被测量成为多肽碎片，去检测某个量（多肽）；与临床样品或二级CRM内，如DA-474内存在的量（五聚体蛋白）不同；在使用免疫检测中，DA-474与临床样品是可互换的。如果单体的比例与用作RMP的校准品，和被RMP检测的样品不同，在这个情况下，一个二级可互换CRM，被测量值被设定到CRM将是不正确的，将在市售可用的免疫产品的校准等级中，引入偏移。

因此，一个一级纯物质CRM的五聚体到单体比率，作为CRP用于校准被测量的一个RMP，是一级CRM和候选RMP的适用性的关键。一个一级CRM必须是五聚体，它的预期用途是为免疫检测制备二级可互换的校准品。否则，一级CRM的设定值，将不正确地反映五聚体形式。另外，在以一级CRM去制备一级校准品中，五聚体结构必须被完整保存。所以，一个一级CRM的完整特性和它用于制备一级校准品，去实施CRP检测的溯源性，必须明白地叙述，以展现它为它的预期用途是适合的和相应的。

JCTLM要求展现等同的程度到一个现有的CRM或RMP，在将一个新的候选CRM或RMP命名，被列入它的数据时^[8,9]。对于CRP，近期没有一级CRM或RMP，作为被测量被列入。2022年12月在米兰举行工作组会议时，生效的方针建议，对新的候选RMP与使用医学实验室的现有检测程序进行比较研究，以检查被测量选择性的相似性。但JCTLM方针没有规定一个特定程序，对一个新的候选一级CRM还没有被列入现有清单中的，如何进行比较。但是，对于一个复杂的被测量，如CRP，必须实现考虑单体的影响。

两个国家计量研究院在会议中分享了数据，他们形成了候选的一级纯物质和二级CRM，为CRP以质谱方法为候选RMP。这些CRM的一些，已经被JCTLM审核任命。依据数据说明，以这些任命的CRM校准的程序，检测的临床样品结果，会与使用近期可用的很好一致的终端用户免疫检测，被校准到DA-474或DA472的检测结果有显著差异。这个情况说明对JCTLM审核过程是一个挑战，由于潜在的偏移会引起对病人结果的错误解释。

数据在会上显示的，展现了引入新的候选较高等级参考的风险，所以为终端用户免疫检测产品确定新的校准等级，在与依据现有计量溯源性到WHO 85/506的结果比较中，可引出临床样品结果不一致。医学实验室的实践会被JCTLM列出一个新CRM与较高等级RMP，是一个负面影响，在现有的明确确定的校准等级下引入一个偏移。研讨会总结出，为CRP的一个新的CRM或较高等级RMP，支持任命的信息必须包括：评估这些新的候选参考对使用终端用户检测程序检测的临床样品结果的影响。相同概念也应用到其他被测量的计量溯源性，如果已经存在一个好的一致性状态。

按照研讨会，JCTLM等效实验程度的方针（the JCTLM policies for extent-of-equivalence experiments）被更新规定，要求更清楚明确。对CRM，在JCTLM-DBWG-P-04A程序中，现在规定“在用于它的预期目的到现有终端用户检测系统的校准等级中, 物质等效程度必须包括考虑新CRM的影响”^[8]。 对RMP，JCTLM-DBWG-P-04B程序的第6.1.2节，现在规定“JCTLM列出的没有较高等级RMM/P情况下，允许去实施这样的等效程度研究，RMM/P提名者被要求实施比较研究，提名的RMM/P与至少一个现有的明确确认的候选RMM/P或已经被用于常规检测实验室的全球可用的终端用户检测程序，实施比较研究。”^[9]。http://publications.jrc.ec.europa.eu/repository/handle/JRC66287[Accesed 1 May 2023]

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