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作者：徐菲 夏骏 单位：浙江省人民医院
尿蛋白电泳
尿蛋白电泳分析是生化室日常工作之一，今天给大家分享一例对非典型的尿蛋白电泳图的解析：我们对一例肾病患者进行非浓缩尿的十二烷基磺酸钠－琼脂糖凝胶（SDS-AGE）电泳发现电泳图谱很特别，其浓染条带位置与常见肾病患者尿蛋白电泳浓染的白蛋白区带位置不一致，显示该蛋白分子量大于67KDa（如下左图箭头所示第2泳道，点样孔在下方；右图为SDS尿蛋白电泳对应条带名称）。
第1和3泳道是一般患者尿蛋白电泳图，可以看出常见肾病患者尿蛋白电泳一般都有一条浓染的白蛋白区带。我们知道，如果是肾小管性蛋白尿则在白蛋白区带的上方多出现小分子蛋白质的区带；如果是肾小球性蛋白尿则在白蛋白区带的下方多出现大分子蛋白质的区带（第1泳道就隐约可以看到）；混合性蛋白尿则大、小分子蛋白质区带都出现。
该患者则不同：出现浓染位置低于白蛋白区带，说明这个位置蛋白分子量大于67KDa，而且在其上方出现两条淡染的小分子蛋白区带。那出现的这个蛋白是什么呢？根据蛋白出现的位置，是不是转铁蛋白呢？ 别急，我们首先来看看病人情况： 患者男，61岁，因“骨痛5月，伴食欲下降1月余”入院。患者无明显诱因下分别出现左侧，右侧股骨疼痛，遂于当地医院就诊，具体治疗不详，治疗后疼痛好转。
行骨髓穿刺检查，考虑多发性骨髓瘤（MM）。患者考虑MM，而且尿游离轻链λ 2683.83mg/L，很高，这些强烈提示我们该区带成分可能是轻链（约25KDa）；那电泳的位置又是否提示有轻链聚合体呢？怎么去验证？首先，我们又将此病人尿液标本做了免疫固定电泳：结果如下图，很明显，λ泳道有浓染条带。证明尿液中出现的就是轻链，并且是λ链。
其次，既然怀疑有聚合体，我们就把它打开，再电泳。我们使用了还原性的上样缓冲液打开多聚体的二硫键，形成单体后重新电泳。结果如下图（1泳道为之前电泳结果对照，2-5泳道为解聚后结果）：在白蛋白上方，在轻链分子量25KDa位置出现浓染条带，而原来位置的条带消失，说明果然有聚合体存在。而且根据分子量判断是轻链的三聚体。
最后，问题得到了解答。如果没有之前两个患者对照图，尿蛋白电泳中白蛋白与轻链三聚体条带相邻，判读电泳图片时就很容易把轻链三聚体条带误以为是白蛋白区带，影响判断蛋白尿的来源。 多发性骨髓瘤（MM）约占所有恶性肿瘤的1%，占所有血液系统恶性肿瘤的12%，虽然在所有恶性肿瘤中的比例不大，但却是发生率最高的血液系统疾病。它以恶性的单克隆浆细胞在骨髓当中聚集为特征，并分泌大量的单克隆性免疫球蛋白或其片段，发生骨质破坏和其他系统损害。轻链是其中一种类型，以单一分泌免疫球蛋白的一种轻链为特征，肾脏损害的发生比较常见，并且容易形成轻链多聚体的形式，对散色速率比浊法进行血尿轻链定量产生影响[1]。 相关文献也有报道轻链容易形成聚合体，且λ轻链更易形成聚合体而使分子量增大。因此虽然正常情况下κ轻链分泌较多，但在多发性骨髓瘤病人λ轻链更容易形成M条带而被检测到。轻链多聚体的形成机制至今仍不清楚，一般认为是形成二硫键所致[2, 3]。 对这份不以白蛋白为主要条带，而是以轻链三聚体为浓染区带非典型图谱的解析，让我们再次积累了宝贵的经验。 【参考文献】 孔宪涛 .免疫球蛋白异常的基础和临床 [M ].上海: 上海科学技术文献出版社 , 1997: 194-208. Tate J R, Mollee P, Carter A, et al. Clinical Utility and Technical Pitfalls of the Serum Free Light Chain ( FLC) [ J]. Clinical Chemistry , 2006, 52( 6): 178. Katzmann J A, Abraham R S, Dispenzieri A, et al . Diagnostic Performance of Quantitative κ and λ Free Light Chain Assays in Clinical Practice [ J]. Clinical Chemistry, 2005, 51(5):878-881. |
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