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简述沙门菌属微生物学检查及鉴定

归去来兮 2021-9-2 73人围观 技术


沙门菌属


沙门菌属体型大多为(0.7~1.5)μm×(2.0~5.0)μm,其无芽胞,是无荚膜的革兰阴性直杆菌,除鸡沙门菌外都有周身鞭毛,能运动,多数有菌毛。

培养特性


营养要求不高,在普通琼脂培养上即能生长,在液体培养基中呈均匀混浊。在SS琼脂和麦康凯琼脂培养基上35℃~37℃ 24h可形成直径约2~4mm的透明或半透明菌落,对胆盐耐受。产H2S者在SS琼脂上形成黑色中心。


生化反应


除亚利桑那菌沙门菌外均不能发酵乳糖,大多数IMViC试验为-+-+,KIA:K/A、产气+/-、H2S+/-,MIU:动力+、吲哚-、脲酶-.



抗原结构


主要由0抗原和H抗原组成,部分菌株有类似大肠杆菌K抗原的表面抗原,与细菌的毒力有关,故称Vi抗原


(1)0抗原:即菌体抗原。沙门菌属的菌体抗原有58种,以阿拉伯数字依次标记:根据沙门菌有共同的O抗原这一特点,分类学者将有共同抗原的细菌归为一组,这就使沙门菌分成42个群(或组)。即A、B、C……Z和O16~O67群。每群都有群特异性抗原,如A群O2、B群04、D群O9等。


(2)H抗原:即鞭毛抗原。H抗原是定型的依据。


沙门菌H抗原有两相,第一相为特异性抗原,用a、b、c……表示;第二相为共同抗原,用1、2、3……表示。


(3)表面抗原:已证实沙门菌属有Vi、M和5抗原三种。Vi抗原加热60℃30min或经石炭酸处理被破坏,其存在时可阻止0抗原与相应抗体发生凝集。


变异性


(1)S-R变异,菌落光滑型经人工培养传代后逐渐变成粗糙型。此时菌体表面的特异多糖抗原丧失,在生理盐水中可出现自凝。


(2)H-O变异,指有鞭毛的沙门菌失去鞭毛的变异。


(3)相位变异,具有双相H抗原(第I相为特异相,第Ⅱ相为非特异相)的沙门菌变成只有其中某一相H抗原的单相菌,称相位变异。


(4)V-W变异,失去全部Vi抗原的变异。


致病性


致病因素有侵袭力、内毒素和肠毒素3种。临床上可引起胃肠炎、肠热症、菌血症或败血症等。其中肠热症属法定传染病。


1.肠热症:即伤寒与副伤寒病。由伤寒与副伤寒沙门菌所引起的慢性发热症状。为法定传染病之一。


2.食物中毒:引起食物中毒的沙门菌以鼠伤寒、肠炎、汤卜逊、猪霍乱、乙型及丙型副伤寒沙门菌为常见。


3.慢性肠炎:沙门菌可引起老人和儿童的慢性肠炎。


4.败血症:多由猪霍乱沙门菌引起。


5.沙门菌的局部感染。如颈部、腰部等。


微生物学检查


标本来源


根据不同疾病采取不同的标本进行分离与培养。肠热症的第一、二周采血液,第二、三周采粪便与尿液。整个病程中骨髓分离细菌阳性率较高。食物中毒采集食物与粪便。


检查方法及鉴定


(1)不同标本的分离培养


 1)粪便:一般将粪便或肛拭直接接种于SS和麦康凯平板上,用两种培养基的目的是为提高标本的阳性检出率。


 2)血液和骨髓:抽取患者血液5ml或骨髓0.5ml,立即接种于含0.5%胆盐肉汤或葡萄糖肉汤5ml试管中进行增菌,48h将培养物移种到血平板和肠道鉴别培养基上,若有细菌生长取菌涂片革兰染色并报告结果。对增菌培养物连续培养7天,仍无细菌生长时,则报告阴性。


 3)尿液:取尿液2~3ml经硫磺酸盐肉汤增菌后,再接种于肠道菌选择培养基或血平板上进行分离培养,亦可将尿液离心沉淀物分离培养。


   4)局部感染的脓液。


(2)鉴定


沙门菌属的鉴定与志贺菌属相同,须根据生化反应和血清学鉴定两方面进行。


 1)初步鉴定:如为革兰阴性杆菌时作氧化酶试验,阴性时,挑取可疑菌落分别移种于KIA和MIU上。并作生化反应。以沙门菌多价诊断血清作玻片凝集试验。凡符合KIA:K/A、产气+/-、H2S+/-、MIU:动力+、吲哚-、脲酶-,氧化酶-,触酶+,硝酸盐还原+,以沙门菌多价血清作玻片凝集试验阳性,鉴定为沙门菌属。


 2)最后鉴定:沙门菌血清学鉴定主要借助于沙门菌O抗原多价血清与O、H、Vi抗原的单价因子血清。甲型副伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌和伤寒沙门菌分别属于A、B、D血清群。


(3)血清学诊断与分型


肥达试验肥达试验是一种试管凝集反应。用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原,与待测血清作试管或微孔板凝集实验,以测定血清中有无相应抗体存在,作为伤寒、副伤寒诊断的参考。


分型


由于沙门菌95%属于A-F群,所以先进行A-F多价O血清凝集,依据6个O因子血清分别定群,分为A群、B群、C1亚群、C2亚群、D群、E群、F群综合H因子血清第一、第二组。依据凝集结果决定所属血清型。


用生化反应鉴定为沙门菌后,需要进一步用分型血清进行分型。沙门菌的血清学分型在鉴定中有着关键的作用。分型应用成套的沙门菌因子血清做玻片凝集法,一般分三步进行:


 ①由于沙门菌95%属于A-F群,所以先进行A-F多价O血清凝集,依据6个O因子血清分别定群:O2凝集者为A群,O4为B群,O7为C1亚群,O8为C2亚群,O9为D群,O3,10为E群,O11为F群。


属于A-F各O群的常见菌型依次用下表所述H因子血清检查第一相和第二相的H抗原



②如疑为沙门菌而A-F多价血清凝集阴性,应用Vi因子血清检查;如凝集则将浓菌液隔水煮沸30分钟以破坏Vi,再与A-F血清试验而定群;如Vi凝集阴性可进一步用OC,OD,OE,OG多价血清鉴定。 


③如是双相菌,进一步用复合因子血清1,2,3,5;e,x,v;l,w检查2相抗原(常见沙门菌的抗原结构一般在诊断血清试剂盒中有详细介绍)。 


沙门菌的预防


加强饮食卫生,防止饮用污染食品及水源,携带者的积极治疗,皮下注射死菌苗或口服减毒活菌苗也可预防沙门菌属细菌的感染。临床治疗主要依据体外药敏试验结果来选用敏感的抗生素,保持水及电解质的平衡,对并发症积极处理,如肠出血、肠穿孔、胆囊炎、心肌炎等。(对于伤寒沙门菌感染,可选择的抗生素有氯霉素、氟喹诺酮类、氨苄西林、复方新诺明、三代头孢等。

 

本文编辑:乐乐高

来自: 微诊网
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