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肝素对脑脊液蛋白测定的干扰一例浅析

归去来兮 2021-4-8 78人围观 技术

作者:李翔翔
单位:苏州市第九人民医院


脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)总蛋白增加是脑脊液中最常见的异常表现,虽然不是某些中枢神经系统的特异性诊断指标,但在相关疾病的诊治中有重要的价值[1]。大多数脑脊液蛋白是血浆蛋白经脉络膜毛细血管壁超滤;脑脊液特有的一些蛋白质是在中枢神经系统中合成的。


脑脊液蛋白浓度升高可能是:毛细血管内皮完整性遭到破坏;血脑屏障的通透性增加;蛛网膜绒毛吸收减少;蛛网膜下腔出血致脑脊液穿刺部位以上机械性阻塞;或鞘内免疫球蛋白合成增高。脑脊液蛋白在细菌性脑膜炎中增加最多(100-500mg/dL),病毒性脑膜炎的增加幅度较小(100 mg/dL),其他炎症性、创伤性或肿瘤性疾病脑出血后也会相应增加[2]。


两性电解质,吩噻嗪类、对十二烷基硫酸钠、柠檬酸、硫酸葡聚糖、EDTA等多种因素已被证明会干扰脑脊液蛋白的测定[3]。有些医生会在脑脊液样本中加入肝素(或采用肝素抗凝管收集脑脊液)以避免感染凝血。


本实验室脑脊液标本的采集一般要求临床采用无菌试管,并于 1h 内送检。


月前的一天下午临下班前,我收到病区送的脑脊液标本(采用绿色肝素抗凝管留取),因病区电话告知尽快出结果,我马上离心上机检测,实验结果见图 1。结果显示,该病人脑脊液其他检测项目结果均正常,但是脑脊液蛋白检测结果为负数,机器上反应曲线(西门子 ADVIA 2400 生化仪、邻苯三酚红钼法,参考范围 0.15-0.45g/L)也异常,考虑到标本送检的不合格,于是我告知临床第二天重新无菌试管采样送检。


图1 脑脊液肝素管采集检测结果


翌日一早,收到该病人脑脊液标本我立即离心上机检测,结果如图 2。脑脊液蛋白结果为 0.24,在正常范围,反应曲线也正常。考虑到两次标本送检容器的差异,我拿今天的标本放于肝素抗凝管中重新离心检测,得出与昨日相同结果(机器报负数做不出)。


图 2 脑脊液无菌试管采集检测结果



案例分析


针对以上结果,我查阅相关文献,Jui-Yi Yang[4] 等人在之前的研究结果中显示,在低浓度(40 mg/dL)和轻度增加(40–100 mg/dL)时,脑脊液总蛋白实验前加入 4 IU/mL 肝素后,血药浓度显著降低,达 91%(通过东芝TBA-120FR分析)。适度增加(100–200 mg/dL)和高脑脊液总蛋白(≥200 mg/dL)分别下降 62% 和 27%。且肝素浓度和脑脊液蛋白检测结果呈一定程度的反比关系,见图 3。该结果提示:脑脊液总蛋白水平正常到轻度升高时,肝素可能对脑脊液蛋白的检测有一定影响。


图 3 肝素对脑脊液蛋白检测的影响


脑脊液蛋白的测定对临床医生的诊治极为重要,如若肝素影响检测结果可能引起临床医生的误诊甚至贻误患者病情。Jui-Yi Yang脑脊液蛋白检测试剂所用的方法为邻苯三酚红-钼酸盐络合物(PRM)法,可能是因为蛋白质(主要是白蛋白)和肝素都是带负电的,肝素有可能与脑脊液样本中的蛋白质竞争PRM从而干扰脑脊液蛋白的结合反应,进而影响实验结果。


本实验室所选标本脑脊液蛋白浓度较低,采用肝素管标本结果也低至检测不出,后续我也收集不同浓度标本进行比对,结果脑脊液蛋白均有一定程度的降低(低浓度降低程度较高浓度明显),与 Jui-Yi Yang 等人的研究成果相符,提示 PRM 法可能确实会对脑脊液蛋白检测造成干扰。但这次探讨也仅仅是较简单的分析比对,对各个环节均没有进行量化分析,有不足之处希望大家可以指出共勉。



总结


我们建议临床医生不要增加脑脊液标本中的肝素,如果真的发生了,脑脊液蛋白不得使用邻苯三酚红-钼酸盐络合物法,以免耽误临床的诊断和治疗。



参考文献:

[1]Chakrabarti A K . Significance of raised protein content in cerebrospinal fluid (a review)[J]. Neurology India, 1975, 23(1):23-31.

[2]Ray P , Badarou-Acossi G , Viallon A , et al. Accuracy of the cerebrospinal fluid results to differentiate bacterial from non bacterial meningitis, in case of negative gram-stained smear.[J]. American Journal of Emergency Medicine, 2007, 25(2):179-184.

[3]Marshall T , Williams K M . Interference in the Coomassie Brilliant Blue and Pyrogallol Red protein dye-binding assays is increased by the addition of sodium dodecyl sulfate to the dye reagents.[J]. Analytical Biochemistry, 2004, 331(2):255-259.

[4]Yang J Y , Chien T I , Lu J Y , et al. Heparin interference in the cerebrospinal fluid protein assay measured with a pyrogallol red-molybdate complex.[J]. Clinica Chimica Acta, 2009, 408(1-2):75-78.


来自: 检验视界网
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