肝素对脑脊液蛋白测定的干扰一例浅析

脑脊液（cerebrospinal fluid，CSF）总蛋白增加是脑脊液中最常见的异常表现，虽然不是某些中枢神经系统的特异性诊断指标，但在相关疾病的诊治中有重要的价值[1]。大多数脑脊液蛋白是血浆蛋白经脉络膜毛细血管壁超滤；脑脊液特有的一些蛋白质是在中枢神经系统中合成的。

脑脊液蛋白浓度升高可能是：毛细血管内皮完整性遭到破坏；血脑屏障的通透性增加；蛛网膜绒毛吸收减少；蛛网膜下腔出血致脑脊液穿刺部位以上机械性阻塞；或鞘内免疫球蛋白合成增高。脑脊液蛋白在细菌性脑膜炎中增加最多（100-500mg/dL），病毒性脑膜炎的增加幅度较小（100 mg/dL），其他炎症性、创伤性或肿瘤性疾病脑出血后也会相应增加[2]。

两性电解质，吩噻嗪类、对十二烷基硫酸钠、柠檬酸、硫酸葡聚糖、EDTA等多种因素已被证明会干扰脑脊液蛋白的测定[3]。有些医生会在脑脊液样本中加入肝素（或采用肝素抗凝管收集脑脊液）以避免感染凝血。

本实验室脑脊液标本的采集一般要求临床采用无菌试管，并于 1h 内送检。

月前的一天下午临下班前，我收到病区送的脑脊液标本（采用绿色肝素抗凝管留取），因病区电话告知尽快出结果，我马上离心上机检测，实验结果见图 1。结果显示，该病人脑脊液其他检测项目结果均正常，但是脑脊液蛋白检测结果为负数，机器上反应曲线（西门子 ADVIA 2400 生化仪、邻苯三酚红钼法，参考范围 0.15-0.45g/L）也异常，考虑到标本送检的不合格，于是我告知临床第二天重新无菌试管采样送检。

翌日一早，收到该病人脑脊液标本我立即离心上机检测，结果如图 2。脑脊液蛋白结果为 0.24，在正常范围，反应曲线也正常。考虑到两次标本送检容器的差异，我拿今天的标本放于肝素抗凝管中重新离心检测，得出与昨日相同结果（机器报负数做不出）。

案例分析

针对以上结果，我查阅相关文献，Jui-Yi Yang[4] 等人在之前的研究结果中显示，在低浓度（40 mg/dL）和轻度增加（40–100 mg/dL）时，脑脊液总蛋白实验前加入 4 IU/mL 肝素后，血药浓度显著降低，达 91%（通过东芝TBA-120FR分析）。适度增加（100–200 mg/dL）和高脑脊液总蛋白（≥200 mg/dL）分别下降 62% 和 27%。且肝素浓度和脑脊液蛋白检测结果呈一定程度的反比关系，见图 3。该结果提示：脑脊液总蛋白水平正常到轻度升高时，肝素可能对脑脊液蛋白的检测有一定影响。

脑脊液蛋白的测定对临床医生的诊治极为重要，如若肝素影响检测结果可能引起临床医生的误诊甚至贻误患者病情。Jui-Yi Yang脑脊液蛋白检测试剂所用的方法为邻苯三酚红-钼酸盐络合物（PRM）法，可能是因为蛋白质（主要是白蛋白）和肝素都是带负电的，肝素有可能与脑脊液样本中的蛋白质竞争PRM从而干扰脑脊液蛋白的结合反应，进而影响实验结果。

本实验室所选标本脑脊液蛋白浓度较低，采用肝素管标本结果也低至检测不出，后续我也收集不同浓度标本进行比对，结果脑脊液蛋白均有一定程度的降低（低浓度降低程度较高浓度明显），与 Jui-Yi Yang 等人的研究成果相符，提示 PRM 法可能确实会对脑脊液蛋白检测造成干扰。但这次探讨也仅仅是较简单的分析比对，对各个环节均没有进行量化分析，有不足之处希望大家可以指出共勉。

总结

我们建议临床医生不要增加脑脊液标本中的肝素，如果真的发生了，脑脊液蛋白不得使用邻苯三酚红-钼酸盐络合物法，以免耽误临床的诊断和治疗。

[1]Chakrabarti A K . Significance of raised protein content in cerebrospinal fluid (a review)[J]. Neurology India, 1975, 23(1):23-31.

[2]Ray P , Badarou-Acossi G , Viallon A , et al. Accuracy of the cerebrospinal fluid results to differentiate bacterial from non bacterial meningitis, in case of negative gram-stained smear.[J]. American Journal of Emergency Medicine, 2007, 25(2):179-184.

[3]Marshall T , Williams K M . Interference in the Coomassie Brilliant Blue and Pyrogallol Red protein dye-binding assays is increased by the addition of sodium dodecyl sulfate to the dye reagents.[J]. Analytical Biochemistry, 2004, 331(2):255-259.

[4]Yang J Y , Chien T I , Lu J Y , et al. Heparin interference in the cerebrospinal fluid protein assay measured with a pyrogallol red-molybdate complex.[J]. Clinica Chimica Acta, 2009, 408(1-2):75-78.