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生化反应曲线看不懂?只因方法没用对

归去来兮 2021-2-18 33人围观 技术


可能很多朋友一看到反应曲线这四个字的时候,都有一种抗拒心理,觉得这个太难了,看不懂。其实吧,看懂生化反应曲线没想象中的那么难。

一、反应曲线是什么?


炒菜,应该大家都会吧?其实,生化项目的检测过程跟炒菜比较相似,炒菜的基本流程是:放油→放菜→放盐,如果每隔18秒,对菜的味道进行打分并记录,再把各个点连接绘成一条曲线的话,炒菜的反应曲线大致是这样的,见下图:


如果只是把油→菜→盐,按顺序放进锅里,这一锅菜应该是没法吃的,对吧?至少得在放油、菜、盐的时候用锅铲搅拌混匀一下,对吧?于是炒菜的反应曲线变成了这样,见下图:


那么,对应的生化项目检测(以奥林巴斯AU系列为例)是这样的:首先,仪器会向反应杯加入试剂1(R1),紧接着加入样本(S), 搅拌混匀,3分钟后加入试剂2(R2),搅拌混匀。在这个过程中,仪器会每隔18秒测试一次吸光度并记录,总共28(0-27)个点,然后连接成线,就是我们所看到的反应曲线,见下图: 


所以,反应曲线是项目检测整个过程的记录,相当于是一个静态的录像。

2、反应曲线怎么看?


在整个检测过程中,试剂1(R1)、样本(S)、试剂2(R2)加入以及搅拌的时间点都是固定的。我们知道了反应曲线是怎么来的之后,需要知道什么样的曲线算正常。

一般正常的反应曲线



a.比较平滑,无明显的跳点;


b.加入R2前后吸光度会发生明显的变化(低浓度样本除外);


c.终点法的反应曲线,会有一段曲线的吸光度基本无变化;


d.速率法的反应曲线,基本成一条直线(两点速率法除外)。

生化的反应曲线可以分为终点法和速率法两大类,以下列举了一些正常的反应曲线供参考:

1) 终点法的反应曲线

反应到达终点后反应混合物的吸光度不再变化(R1主要用于消除干扰,R2加入之后,反应启动),就像你炒好的菜在一段时间内味道是不变的。如下图:


2) 速率法的反应曲线

随着反应的进行,吸光度越来越大,但速率保持不变,R2之后基本成一条直线,无明显跳点(两点速率法除外),如下图:

注:上图在加入R2之前为虚线,是因为R1+S的体积小于仪器要求的最低的反应总体积。


我们在看反应曲线的时候,眼里是一条曲线,脑袋里面浮现的应该是整个的检测过程,去还原仪器的动作,分析从什么时候吸光度突然变得异常。你可以想象成这盘菜是怎么炒出来的。

3、反应曲线有什么用,

什么时候用得着?


(1)结果出现负值(终点法项目)

a.反应曲线有可能是一条直线,样本或R2有可能没有加入;
b. R2加入之前的吸光度比加入后还高,试剂1和试剂2位置放反或者严重脂血标本。

(2)结果明显偏低(速率法项目)

反应曲线可能变成了类似于终点法的曲线,也就是我们通常说的底物耗尽,需要稀释重测。

(3)试剂过期或污染、搅拌棒破损、携带污染以及冲洗站滴水也会在反应曲线上有所体现。

总之,在结果比较可疑的情况下,可以调出反应曲线看看是否正常,有助于找出问题所在。

4、注意事项


1)不同厂家或型号的仪器,加入样本和试剂的顺序可能不同,比如,日立是S+R1+R2。

2)部分仪器横坐标是直接用时间表示,比如贝克曼LX/Dxc系列用的是秒,另外LX/Dxc系列的加样顺序有可能是R1+S+R2或者R1+R2+S。

3)部分仪器没有把各个点连接起来,所以看到的是由点组成的曲线。

4)看反应曲线时,注意纵坐标的刻度,就像远看是美女,近看就不一定了。

5)反应曲线界面还可以看到很多的信息,比如:光电校正、试剂空白、定标的时间以及每一点的吸光度,这些都会有助于判断结果异常的原因。

所以,你应该已经意识到,当有人问为什么某项目的结果偏低、不正常时,仅凭一个结果是很难判断的。

5、其他


临床医生在诊断病情时一般会参考各科的检验报告单,反应曲线相当于是检验科判断结果准确性的“检验报告单”。在遇到可疑的结果时,建议大家调出反应曲线看看。另外,其他仪器也有类似的功能,比如:糖化有层析图,血球仪有散点图等。希望大家能够用好各种仪器提供的“检验报告单”,提高工作效率。

来自: 检验视界网
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