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感染性疾病的正确诊治需要以正确的病原学检测作为指导,而正确的病原学检测其前提是采集和送检合格标本。无论是血液、肺泡灌洗液、还是组织、脑脊液,样本的质量直接影响后续检测的准确性和可靠性。 01.脑脊液 ![]() 脑脊液标本采集可以按照临床腰椎穿刺常规操作方法。尽量避免脑脊液标本中混入血液。建议送检第2管或者第2管之后的标本,送检量2~5ml,采用无菌冻存管,送检前尽量减少对标本的额外分装。 适配场景:中枢神经系统感染相关(病因未明的脑炎、脑膜炎及脑膜脑炎;重症中枢神经系统感染等)。 02.血液 ![]() 血液标本采集前,应严格做好穿刺点及周边皮肤的清洁和消毒,持针器肘静脉采集3~5ml(不同实验室要求不同),采用专用采血管,即游离DNA样本保存管保存,采血后上下颠倒混匀5~10次。切忌在输液处或导管处采集血标本。 适配场景:血流感染相关(脓毒症、菌血症、导管相关性血流感染等),不明原因发热等。 03.肺泡灌洗液 ![]() 需有经验的临床医师,仔细阅读胸部CT影像,肺泡灌洗部位为CT上病灶相应部位,取5~10mL置于无菌容器。收集灌洗液时,弃去前段可能污染的部分,回收第2管及以后的标本。 适配场景:下呼吸道感染相关(肺部感染,特别是免疫受损患者肺部机会性感染的病原体诊断;肺部不明原因阴影、疑似肺部感染或需与其他疾病鉴别等)。 04.痰液 ![]() 咳痰标本建议清水或0.9% NaCI溶液漱口2~3次,然后用力咳出深部痰至无菌痰杯(需留取至少3~5mL),建议在医护人员监视下完成。若无法咳出深部痰,可用3%~5%浓盐水诱导深部咳痰;若无法自主咳痰或有人工气道,采用人工气道或气管镜吸痰。 适配场景:下呼吸道感染相关(咳嗽、脓性痰,伴有发热,影像学检查出现新的或扩大的浸润影;气道开放患者,出现脓痰或血性痰等)。 05.肺组织 ![]() 经支气管镜的肺组织活检需有经验的临床医师,仔细阅读胸部CT影像,局灶性病灶需在透视下或超声、导航精确定位下,进行病灶穿刺活检;靠近外周病灶,在CT或彩超引导下行肺穿刺活检。 组织标本体积至少为5mm3(约黄豆粒大小),穿刺组织最少2条,均需置于组织采样管中。新鲜组织采集后不可添加福尔马林;若穿刺组织过小有干燥可能,可添加少量保护液或无菌盐水浸润组织。 适配场景:下呼吸道感染相关(重症肺炎、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、脓毒症等危重症肺部感染等)。 06.拭子 ![]() 拭子采集应在清洁创面后尽可能取感染基底部位,选择有专用保护液的拭子采集套,若标本检测前过分干燥,可能影响检测结果。 鼻咽拭子则需使用专用的鼻咽拭子采样包,嘱患者先擤鼻涕,头部向后稍微倾斜,以便拭子更容易通过鼻腔到达鼻咽部,沿着鼻中隔轻柔插入咽拭子,直到有阻力感提示拭子已经达到鼻咽底部。 适配场景:皮肤及软组织感染(有脓性分泌物,无法进行组织活检时);上呼吸道感染;泌尿系统感染(无法获取清洁中段尿);生殖系统感染等。 07.其他体液 ![]() 超声引导下或CT引导下穿刺后直接留取标本,不从已留置多日的引流管下端留取。 胸腔积液、腹水需留取至少10mL;关节积液需留取至少2mL;脓肿抽液需留取至少3mL,中后段尿液需至少5mL。 若为开放性脓肿,需清创后采集深部伤口或溃疡基底部分泌物拭子置于无菌管中。若为封闭的脓肿,需对病灶局部的皮肤或黏膜表面彻底消毒,用注射器抽取脓液后留置。 若患者怀疑分枝杆菌感染,对于较容易留取的胸腔积液、腹水、尿液标本,建议多次留取,取沉渣10mL送检。 适配场景:感染性胸/腹膜炎、不明原因发热伴胸腹水积液;感染性关节炎、不明原因关节积液;深部脓肿感染、复杂或复发性皮肤软组织感染;泌尿系统感染等。 08.福尔马林固定石蜡包埋样品切片 ![]() 建议病理科医师镜下阅片后取可疑感染病灶处切白片10~15张,脱蜡后送检。 该类标本易在制备过程中受到微生物污染,且核酸质量较差,检测过程复杂。不作为主要标本类型推荐,仅作为无法获得新鲜组织或其他病灶相关标本时的备选。 适配场景:已进行组织活检或手术切除,且样本已固定包埋保存的病例,当临床怀疑存在感染但当时未明确病原体时,可通过FFPE样本进行病原微生物检测。 ![]() 标本保存与转运 转运 所有样本均应及时送检。 针对血液样本,可常温运输(若夏季高温天气,建议冰袋低温运输);其他样本在24 h内到达实验室并开始检测,可考虑冰袋低温运输;若运输时间 24~72 h,应干冰运输(血液样本应先分离血浆后保存运输)。 保存 不能及时送检样本长期保存原则: (1)血液标本可置于4℃冰箱保存,但最长保存时间不得超过7d(游离DNA采血管)。 (2)其他类型临床标本如不及时送检,可于-20℃保存,但最长保存时间不超过7d;若需长期保存,应置于-80℃冰箱。 (3)应避免标本的反复冻融,一般不得超过3次。 (4)若怀疑高致病性或突发传染病,严格按照国内传染病法等相关法律要求包装及转运。尽可能在医院生物安全防护条件下抽提核酸后再送测序。 参考文献: 1、宏基因组分析和诊断技术在急危重症感染应用的专家共识 2、高通量测序技术在分枝杆菌病诊断中的应用专家共识 3、中国宏基因组学第二代测序技术检测感染病原体的临床应用专家共识 4、中枢神经系统感染性疾病的脑脊液宏基因组学第二代测序应用专家共识 5、宏基因组二代测序技术在新生儿感染性疾病中的临床应用专家共识 6、高通量宏基因组测序技术检测病原微生物的临床应用规范化专家共识 7、呼吸系统感染中宏基因组测序技术临床应用与结果解读专家共识 8、宏基因组二代测序技术在血液病患者感染病原诊断中的应用中国专家共识(2023年版) 9、宏基因组高通量测序技术应用于感染性疾病病原检测中国专家共识 |