低密度脂蛋白胆固醇测定交叉污染干扰分析

面气灵 2019-3-7 10:52 AM 1509人围观杂谈

前言

在检验科日常工作中，生化检验项目之间交叉污染干扰，往往容易被忽视，不易被觉察。

我们在日常工作中需要通过结果比对，室内质控及室间质评等手段控制仪器的检测性能，尽力保证工作质量。

笔者就通过室内质控结果，发现了低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）测定交叉污染问题，干扰测定结果。

案例经过

下面是发现问题的两份室内质控结果记录。图1和图2

图1

图2

4月26日

所有项目的质控结果都是在控的，尤其是LDL-C的结果1.03mmol/L，设定均值也是1.03mmol/L。

4月27日

LDL-C质控结果1.41mmol/L，1-3S报警，超过3SD。

查看常规标本所有血脂四项的结果都没有问题（图3，当天的一个检验结果），仪器没有报警，仪器的检测性能是正常的。LDL-C的试剂两天都没有动过，用的是同一盒的同一瓶试剂，没有校准，正常开机，检测仪器，性能正常，先上质控，后上常规标本，一切都是按部就班，生化班的流程。

图3

回顾整个检测流程，两天都是一样的，试剂、质控品、清洗剂都没有改变，只有LDL-C的质控结果报警，常规标本LDL-C的结果没问题。查看LDL-C的反应曲线没有问题（图4和图5）。

图4

图5

将当天的那支质控血清当常规标本上机测定LDL-C，测定结果是1.05mmol/L，是正常在控的。当天的血脂四项结果正常审核发出报告。次日继续观察。

4月28日

LDL-C的质控结果是1.48mmol/L，又是报警1-3S。情况和前一天（4月27日）是一样的。重测LDL-C的质控结果是1.07mmol/L，是在控的。上完常规标本分析后进行了校准，另取一支质控血清单独测定LDL-C,结果是1.04mmol/L，是正常在控的。还是没有找到问题所在。

下表是LDL-C质控结果数据整理（单位mmol/L）：

不能再耽误了，连续观察了7天，排除了各种可能性，问题还是存在。联系了代理商临床工程师陈工，反映了当前测定问题，陈工详细了解了使用情况，回复说可能是交叉污染问题，会安排时间到现场解决。

5月11日，陈工程师过来指导。抽查做了质控重复性测定，项目及结果如下图6。查看了最初导入的项目测试顺序是：Ca、ALT、r-GT、TG、UREA、LDH、GLU-G、TBIL-V、DBIL-V、TBA、AST、ALP、TP、ALB、α-AMY、LDL-C、HDL-C、CREA-S、UA、CO2、ASOⅡ、RFⅡ、CRP、TC、K、Na、Cl。

图6

当时我们刚开业不久，每天测定的项目是相对固定的，批量做慢非科的建档体检。测定项目是：ALT、AST、GLU、TBIL、UREA、CREA、TC、TG、HDL-C、LDL-C。详看附图3。

我们从4月26日开始做批量慢非科体检，人数是113人，4月27日开始LDL-C质控结果出现1-3S报警。4月26日之前每日的标本量不超过10个。

笔者查看了仪器的《使用说明书》，稀释清洗剂的配比是1：10（1份CD80浓缩清洗剂：10份去离子水），用于清洗反应杯和搅拌杆。而仪器安装工程师配制的浓度是1：14的稀释清洗剂，我们是按工程师说的比例配制清洗剂。

陈工说反应杯冲洗不干净也可能是原因之一，关键是项目之间试剂交叉污染。最初导入是ALB、α-AMY、LDL-C,中间有α-AMY隔开ALB与LDL-C,由于我们没有开展α-AMY测定，质控项目就由ALB直接到LDL-C,有试剂交叉污染，干扰结果。

ALB与LDL-C测定试剂盒比较：

从比较中可知，ALB与LDL-C前后相邻测定，清洗不够干净，试剂之间容易有交叉污染，两者的反应都是显色反应，颜色的深度与样本中浓度成正比，而且反应波长比较接近，也会干扰测定结果。

这就可以解释，为什么LDL-C只有质控结果失控，常规标本测定又正常，因为慢非科体检项目没有ALB,测试顺序是从AST到LDL-C,没有交叉污染，也就不会干扰LDL-C的结果。单独测定LDL-C质控血清更没有干扰了。

于是将项目测试顺序调整为：ALP、LDL-C、HDL-C、TP、ALB、CREA-S、UA，其它项目顺序不变。陈工解释说先初步调整一下，还要继续观察其它项目的结果，根据实际需要调整测试顺序。

我们还将稀释清洗剂的配比调整为1：10。经过连续观察质控测定结果，发现ALB对CREA-S和UA先后出现交叉污染，干扰结果，质控结果如下图7、8、9。

图7 (干扰肌酐测定)

图8（干扰尿酸测定）

图9 (调整后的结果)

经过观察和调整，最终确定了项目测试顺序为：

Ca、r-GT、TG、UREA、LDH、GLU-G、TBIL-V、DBIL-V、TBA、CREA-S、AST、ALP、LDL-C、HDL-C、TP、ALB、α-AMY、 ALT、UA、CO2、ASOⅡ、RFⅡ、CRP、TC、K、Na、Cl。

案例分析

我们从ALB、LDL-C、CREA-S、UA的检验原理和测定条件分析为什么会产生交叉污染，干扰结果。检验原理和测定条件看截图。

ALB截图

CREA-S截图

LDL-C截图

UA截图^[2]

LDL-C、CREA-S、UA三者的反应过程中都包含Trinder反应，过氧化氢经过氧化物酶（POD）催化4-氨基安替比林与酚（三者合称PAP），生成红色醌亚胺色素（Trinder反应）^[1]，有4-氨基安替比林（4-APP）参与反应，反应终产物LDL-C(醌亚胺)、CREA-S(醌亚胺)、UA（醌系色素染料），都是红色醌系染料，显色反应。

所以三者排在ALB后相邻测定都会产生交叉污染，干扰结果。血脂四项（TC、TG、 HDL-C、LDL-C）都应与ALB隔开测定，消除交叉污染，干扰结果。

总结

经过一段时间的临床应用、观察，质控结果和常规标本测定保持稳定，没有再出现交叉污染的问题。质量是检验工作的核心，只有保证了工作或检测质量才能保证检验结果的准确性或精确性，才能为临床提供可靠的诊治依据，从而保证医院的服务质量和水平。每个检验工作者都深知这一点，所以无不为了保证工作质量而努力。