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核酸提取方法简介

归去来兮 2024-5-23 04:00 PM 143人围观 医学


核酸提取是从复杂生物样品中分离提取出DNA或RNA分子,以获得纯净的核酸样本。这对众多核酸分析技术具有关键支撑作用。提取纯净的核酸,可以提高后续检测的特异性和灵敏度,去除试验结果中的矩阵干扰。定量测定核酸浓度,直接反映样本中的核酸含量。提取的核酸可用于PCR、Southern杂交、基因测序等分子生物学实验,以及疾病诊断、生物进化研究、生物多样性分析等应用。常用的核酸提取方法有如下5种。


一、酚-氯仿提取法


1. 原理:酚能与核酸中的碱基发生Stacked相互作用,使核酸溶解;氯仿可溶解脂肪,用于除蛋白。

2. 主要步骤:样品破碎、裂解、Proteinase K消化、酚提取核酸、氯仿-异戊醇除蛋白、DNA沉淀、70%乙醇洗涤、TE缓冲液溶解DNA。

3. 优点:提取效果好,可以得到完整的DNA/RNA。

4. 缺点:操作复杂,有机试剂残留。


二、硅酸盐提取法


1. 原理:硅酸盐如硅土或玻璃粉可吸附核酸,经洗脱后可获得相对纯净的核酸。

2. 主要步骤:样品破碎,加入细碎硅土粉,煮沸使 DNA 吸附在硅土上,12000rpm 高速离心去除杂质,TE 中洗脱并收集 DNA。

3. 优点:操作简便。

4. 缺点:易得到降解的 RNA。


三、磁珠提取法


1. 原理:利用功能化磁珠通过与核酸的相互作用把核酸捕获,磁分离快速提取。

2. 主要步骤:裂解样品,添加磁珠孵育使核酸吸附,磁力分离吸附磁珠,洗涤去杂质,洗脱下获得核酸。

3. 优点:具有特异性,提取快速,可自动化。

4. 缺点:需要专用仪器和耗材。


四、离心柱滤管法


1. 原理:离心管内置吸附核酸的滤膜,样本经过滤后,离心脱液收集核酸。

2. 主要步骤:裂解样品,加入过滤管,高速离心,洗涤滤膜去除杂质,缓冲液洗脱并收集核酸。

3. 优点:操作简便快速。

4. 缺点:对样本量和质量要求较高。


五、直接磁珠裂解提取法


1. 原理:利用裂解液和磁珠同时裂解样品并吸附核酸。

2. 主要步骤:混合裂解液、样品和磁珠孵育,磁分离吸附磁珠,洗脱获得核酸。

3. 优点:快速,提取效率高,无有机试剂。

4. 缺点:需要配套试剂盒, mechanic破碎和冻融影响提取。



本文编辑:小薇

来源: 纳捷诊断
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