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白管在荧光定量PCR实验耗材选择中的优势和应用

mango524 2023-4-23 12:00 AM 427人围观 医学

PCR实验时使用透明管,得到的实验结果荧光信号值比较低,曲线被压得很低,坐标轴也不能自适应曲线,显示如下图。



而正常情况如下图,纵坐标的范围是可以随着曲线最大荧光信号值而变化的,并可获得一条漂亮的S曲线。



更换成白管后,问题就迎刃而解了。那么,问题来了,为何做qPCR实验时一定要用白管呢?荧光信号值与哪些因素有关呢?我们一起来学习一下吧~

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白管PK透明管

PCR管/板常见的有白色和透明两种。在传统PCR实验中,两者在使用效果上没有太大差异,相比较透明管更为方便,因为实验者更容易看清楚试剂加上与否。但在荧光定量PCR实验中,白管的优势就凸显出来了。

优势一:白管管壁支持一致的信号反射,提高qPCR结果的一致性。
qPCR实验的核心数据是Ct值,而荧光信号是Ct值计算的数据来源,所以管内的荧光能否完好地传递至顶部的检测器是至关重要的。

如下图是三种不同透明度的管子,因为透明管四周均是透明的,对于底部试剂激发出来的荧光会散向四面八方,管内的荧光信号只有少量能到达管顶部,最终只有少量信号进入检测器,且管间荧光信号不一致。


图1 白管和透明管内部荧光信号路线图


然而,如图1所示,与其他管材相比,白管管壁不透明,几乎没有信号丢失,且隔绝了样品台污染的荧光信号干扰,减少了相同样本孔间差异。

优势二:白管支持最大限度的信号传输,改进对低拷贝数样本的检测,提高灵敏度。


图2 白管和透明管检测信号对比图


从图2中可以看出,同样试剂量的情况下,到达检测器的信号强度,使用白管明显高于透明管。因此相比于透明管,使用白管可明显提高检测器检测到的信号强度,提高qPCR数据的灵敏度。

优势三:支持更小体系扩增,节约实验成本。


正因为白管有着高灵敏度的特性,使用白管可以采用小体积反应,从而可减少实验试剂量,大大节省成本~

图3 白管扩增结果展示图


国际一线品牌也同样证实白管更适合实时荧光定量实验的结论。


如上图,qPCR使用透明和白色耗材的结果比较:


(A)与透明孔相比,白色孔Ct值更低(灵敏度更高)


(B)白色孔在技术重复中也表现出更高的一致性


在设置实时PCR或qPCR的反应时,与透明耗材相比,更推荐使用白色耗材,以实现灵敏和准确的荧光检测。




Sarstedt



那么荧光定量PCR仪需要采用什么技术才能满足使用白管呢?我们来看一下国际主流品牌的定量PCR仪产品,一探究竟吧~


我们来看一下赛默飞的高端系列Q5和Q7,他们用的是CCD顶部检测的技术方案,再来看一下罗氏的旗舰产品LG480,我们可以看到,他们用的也是CCD顶部检测技术。



顶部CCD检测技术光学部件固定,稳定性好,故障率低,对荧光信号的接收和处理能力强,是定量PCR仪检测技术的大势所趋。



综上所述,在进行qPCR实验时,使用白管和顶部检测技术的qPCR仪,可获得更佳实验结果。

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END





原作者: IVD原料网
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