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实战经验分享:解剖血液分析仪,一步步解读为什么会堵?

归去来兮 2021-5-24 10:56 AM 1523人围观 技术


作者:王东红  韩素丽  郭锐芳
审校:刘广明
单位:长治医学院附属和平医院







医学实验室在不停的发展,变化之快超出我们的想象,实验室将面临种种的挑战,高质量、高效率、高自动化将是实验室未来的发展方向,不同的自动化仪器将进入实验室。


因此我们就来解剖一款血细胞分析仪,型号为贝克曼DXH800。血细胞分析包括计数和分类,我们主要分享的是白细胞五分类的液路系统。




血细胞五分类的液路系统



白细胞五分类的液路包含三个核心的部件:混匀池(mixing chamber)、鞘液罐(Sheath Tank)、流动池(Flowcell)。



混匀池的主要作用是制备样本,样本经过特殊的溶血素处理后,进入流动池进行分类,在分析之前要形成鞘流,所以要有一个鞘液的储存场所——鞘液罐,有了它的存在,就能保障大批量样本连续测定;分类的核心是流动池,它的主要作用是样本在鞘液的包裹下,以层流形式通过光检测区,在激光光源的照射下,对电阻抗、电导及散射光(VCS)的分析,从而对白细胞进行分类。


谈到液路无非是试剂和样本,而试剂包含了2种溶血素,酸性和碱性溶血剂。



酸性溶血剂(E-Lyse):它的渗透压较小,主要使细胞膨胀,因为红细胞膜上胆固醇成分比白细胞多,所以红细胞先膨胀破裂,白细胞只是膨胀但未破裂。     

碱性溶血剂(S-Lyse):它的渗透压比较大,补偿了样本中未破裂细胞的渗透压,使膨胀的白细胞又恢复到了原态。
                                      
注意:区分CBC溶血剂:CBC Lyse渗透压大,使细胞皱缩;CBC Lyse还要与RBC中的HGB反应,生成血红蛋白复合物,进行血红蛋白测定。




硬件介绍




01
混匀池


通过混匀池制备的样本,我们要对它有2个要求:一只能是WBC,二要接近于人体自然状态的WBC。

混匀池有7个小孔,上面的塑料端口是酸性溶血剂与样本的进入端,侧面端口是碱性溶血剂的进入端,上面铁制孔是用于接通空气并加正压,是动力小孔,为样本进入流动池提供压力,下面端口是样本进入流动池的通道;上面中央最大的铁制孔是鞘液进入端,用于测试完一个样本后对混匀池的清洗,再通过下端口排出;上面最后一个塑料口是乳胶颗粒的进入端,乳胶颗粒是人工制备的细胞颗粒,它主要是对仪器的光路和整个流体压力进行校准,在标本检测中不使用。混匀池是固定在一个轮子上的,轮子是带着混匀池进行往返摇动,使得样本与试剂充分混匀。



02
鞘液罐


混匀池样本制备完成进入流动池进行测试前,要与鞘液结合。而鞘液储存在鞘液罐中,鞘液罐最核心部件就是液面探测的浮子,浮子会随着液面的高低,上下浮动,如果鞘液液面过低,上面浮子开关就会打开,从上面端口的加压系统,加入负压,罐子里的负压会使鞘液进入,鞘液的液面开始上升,等上升到一定高度后,浮子开关关闭,罐内负压消失,液面停止;如果有样本测试时,上端口加入正压使鞘液进入到流动池,包裹着细胞形成单细胞束。



03
流动池


外观上有6个孔,上下为样本进入端和排废端,侧面自下而上1、2、3、4为上下鞘液进、出口,一般情况下2、4鞘液出口为关闭,只有仪器在执行开机、关机、清洗流动池的时候才打开。

分类计数小孔位于流动池的中央。两个圆锥形的电极位于小孔的上下两端,流动池的上下两个腔体内注满了稀释液为上下两个电极之间提供导电介质。

由于样本流和鞘液流的压力及粘质性的不同 ,使得它们不会被混合,从而保证样本束中的细胞一个一个的通过分类小孔。




自动化智能分析




01
计数与时间的概念


实际工作中样本是成批量进行分析的,那如何保障自动化分析流程不中断呢?比如遇到样本有凝块,样本量过少时,仪器又该如何停止对样本检测,去进行下一个样本的测试呢?那就要弄清几个概念:


DC Count (total count) = 经过流动池的白细胞数量要达到8192(=213 )个,才能保障分类结果的准确性。


Displayed Count (显示到散点图上的细胞数) = 比较理想的数字≥7500,也就是计数总时间90%时的细胞数。


DC Count Time (in seconds) = 计数达到8192个时需要的总时间。



当遇到样本中细胞数量达不到时,就要引入一个另一个概念:最优化时间T(秒)=63/WBC±1秒。


如果优化时间超过优化时间的50%,计数仍未达到 8192个颗粒,就会提示报警:Low Event D,而进入下一个样本的测试。

如果优化时间低于优化时间的50%以下,也会报警:High Event D。



02
DIFF常见报警分析



  • Low Event D :Flowcell部分堵住,计数时间太长。 

主要原因:

1、样本流路堵塞:流动池部分堵、进样管堵或者折住或者破。

2、分类压差降低:混匀池上有管子破裂、混匀池破、调节阀问题等。  

3、鞘液压力过高。

4、样本没有进入Flowcell。

5、到达mixing chamber的样本浓度偏低:分类用的的管子中样本不足、分类用样本没有完全到达mix chamber、mixing chamber顶部是否脏、mixing chamber是否完全排空等。

6、WBC计数偏高,造成规定时间偏短。

  • High Event D:Flowcell部分堵住,计数时间太短。

High Event D的定义:优化时间低于优化时间的50%以下。

主要原因:

1、化学平衡问题:mix chamber动作异常、样本进入混匀池的速度慢、E-LYSE或S-LYSE的量不正确或不匹配、Heater管子折住、试剂异常、环境温度偏低等。

2、样本的问题:其具体原因是一些特殊的样本如肝炎病人,新生儿,孕妇等,这些病人的RBC表面的负电荷较多,E-Lyse不足以将其溶解;或者是这些病人血样中胆汁酸的含量偏高,胆汁酸会与E-Lyse反应,从而大量的消耗了E-Lyse。这些病人需要稀释做。

3、Flowcell中有气泡:鞘液罐空。

4、分类第一秒钟没有样本经过Flowcell:进样管破、与鞘液有关的阀的问题等。

  • Flow Cell Clog D:Flowcell完全堵住,仪器停机,这种情况不多见。

做为新时代的检验人,不止要知其然更要知其所以然,我们不能只做机器似的检验人,每天循环似的上机审核,仪器故障停机等候工程师维修,我们要自己了解标本上机后结果如何而来,仪器故障时知道问题所在。


来源: 检验医学网
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