卡他莫拉菌快速鉴定的方法学及耐药性研究（上）

卡他莫拉菌(moraxellacatarrhalis ,MC)为革兰阴性双球菌, 原属奈瑟菌属(Neisseria catarrhalis ,NC), Catlin 在1970 年将此菌分类为布兰汉菌属(Branhamellacatarrhalis , BC), 1984 年在伯杰分类细菌学手册中被列为莫拉菌属的布兰汉亚属(subgenus branhamella)。MC 是人类上呼吸道的常居菌种, 为条件致病菌。该菌可引起人类的多种感染, 可累及全身。国外资料显示,MC 在成人下呼吸道感染及儿童肺炎、中耳炎等标本中的分离率, 仅次于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌列第三位。因此, 快速鉴定MC具有重要的临床意义。我们用3-乙酰吲哚纸片法检测乙酰酯酶, 快速鉴定MC。并测定4 种β内酰胺抗生素的复方制剂及亚胺培南/西司他丁对β 内酰胺酶阳性MC 的抗菌活性。报告如下。

材料和方法

一、材料

1. 菌株来源: MC (228 株)、淋病奈瑟菌(15株)、脑膜炎奈瑟菌(3株)、奈瑟菌属(153 株)、莫拉菌亚属(24 株)、博德特菌属(6 株)、不动杆菌属(138株)均为临床分离株。标准菌株MC 9602 , 9707 , 0101为全国临床检验中心质控菌株,MC 的ATCC 25238 、解乳糖奈瑟菌ATCC 23970 、淡黄色奈瑟菌ATCC14799 、脑膜炎奈瑟菌ATCC13102 、金黄色葡萄球菌ATCC 25923 ,29213 为本实验室菌库保存。

2. 培养基: 5 %羊血琼脂培养基(SBA), 5 %兔血巧克力琼脂培养基(RChoc), 5 %羊血巧克力琼脂培养基(SChoc), 含50 μg/ml 万古霉素的兔血巧克力琼脂培养基(Choc-V), 淋病奈瑟菌培养基(NGA), MH培养基(MHA), 5 %羊血MH 培养基(MHB), 脑心琼脂培养基(BCA), 营养琼脂培养基(NUA), 中国蓝琼脂培养基(ZLA),DNA 琼脂培养基均为本室自制。

3. 试剂: 蛋白胨、DNA 琼脂粉、MH 琼脂粉、VITEK-(NHI 和GNI)鉴定试卡购自生物梅里埃公司。万古霉素为美国礼来公司产品, 盐酸四甲基对苯二胺、3-乙酰吲哚购自SIGMA 公司,Nitrocefin 购自OXOID 公司(英国)。氧化酶纸片(1 %盐酸四甲基对苯二胺溶液浸泡纸片后吹干备用), 乙酰酯酶纸片(100 mg/ml 3-乙酰吲哚丙酮溶液浸泡50 片纸片后吹干备用), Nitrocefin 纸片(12.5 μg/片Nitrocefin吹干备用)。

4. 抗生素: 哌拉西林(PIPC), 齐鲁制药厂产品; 氨苄西林(AMP), 华北制药有限公司产品;哌拉西林/舒巴坦(PIPC/SBT)(4∶1), 海口杰威药物研究所有限公司产品;哌拉西林/他唑巴坦(PIPC/TAZ)(8:1),美国立达公司产品;氨苄西林/舒巴坦(AMP/SBT)(2∶1), 头孢哌酮/舒巴坦(CFP/SBT)(1∶1), 美国辉瑞公司产品;亚胺培南/西司他丁(IPM/CST)(1∶1), 美国默沙东药厂产品。

二、方法

1. 菌株分离与鉴定: 将可疑标本接种于SBA 和Choc-V 琼脂平板上, 置5 %CO2 孵箱, 35 ℃培养24 ～72 h 观察结果。细菌的分离培养和鉴定按文献进行, 分离到的菌株经涂片革兰染色镜检、触酶、氧化酶试验后, 用VITEK-(NHI 和GNI)鉴定试卡鉴定到种。

2. 氧化酶试验: 按文献[ 5] 进行。

3. DNA 酶试验: 按文献[ 5] 进行。

4. 乙酰酯酶试验:用无菌生理盐水将3-乙酰吲哚纸片沾湿, 取待检菌落涂在纸片上, 3 min内出现蓝绿色为阳性反应。以MC 的ATCC 25238 , 全国临床检验中心质控菌株9602 , 9707 , 0101 作为阳性对照。