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定性检验如何做质控?听听冯仁丰教授怎么说

面气灵 2019-4-3 247人围观 人物



本刊顾问、上海市临检中心冯仁丰教授长期从事实验室质控的研究,为了我国实验室质控水平的提高可谓呕心沥血、殚精竭虑。冯老师不仅就质控问题常有卓见,更敢于揭露国内检验界的一些弊病,其高论往往振聋发聩,引人深思。目前,检验界对于定性检验的质量控制,无论国内外都尚无较好的做法,冯仁丰教授对此也一直在学习与思考中,现以乙型肝炎表面抗原检测的质控问题为例,提出以下几点看法,供参考。
1、临床实验室必须如定量检验那样,每个定性项目均有详细而不含糊的操作规程,并按此实施。这是做好整个定性检验的重要步骤。
2、对于所用的试剂与仪器在进行病人标本检测前,必须经过验证。用真实病人样品进行实验,以实验结果证实仪器和试剂符合临床实验室要求。
3、选择适用的控制品。每批检验必须检测至少两个控制品。一个为阳性控制、一个阴性控制。
4、严格操作。不可因标本量大,随意更改操作的规定要求。如:进行HBsAg的ELISA检测时,规定每孔加入100 ml的样品,有的人员习惯使用毛细滴管加4滴。这样的做法势必降低了操作精密度。如果每一步都这样做,叠加的问题就会变得很严重。
5、对试剂盒的验证,实际上是观察在非常认真的操作下,这些酶标板产品的质量。至今依然在使用国产ELISA产品的临床实验室,更应注意这个验证工作。而且,这也是以后开展每天质量控制的基础。具体的做法可以考虑:
(1)一块板上96孔间的变异:应该任意选择一块酶标板,使用阴性血清和阳性血清(选择P/N比值在3~5左右)各一,一半板进行阴性血清的实验(约40孔),还有一半进行阳性血清的实验。将两个血清的这些结果分别计算吸光度的均值和标准差。求阴、阳性血清各自结果的板内CV
板内。这是一块板内的变异(包括了各个孔间的变异、和操作人员自身的操作变异),备用。
(2)板间变异:另外,任意取10块板(最好一批产品内不同包装中各抽取一块)。在这些板上的任何孔内,各做一个阳性血清与一个阴性血清的实验。读取吸光度。将10块板的阴性与阳性结果吸光度各自统计计算均值、标准差和CV。这是ELISA产品板间的变异加上操作人员操作的变异。因此,进行这个实验的操作人员应了解孔间变异时,是同一个人员的板间CV
板间
(3)批间差异:同一公司不同批号的板间差异。应累积10个批号以上的产品,每个批号取一块板,如上进行阳性和阴性的实验。计算阳性和阴性样品的吸光度均值、标准差和CV。这是批号间的差异。注意,以上实验采用的阳性和阴性样品,一定是相同批号或相同来源的血清样品!
(4)将一块板内的CV,与板间的CV、与批号间的CV进行加成。

实际为:

 
这是ELISA产品质量的实际指标。临床实验室可以对各家提供产品的公司分别进行实验验证,选择合成CV最小的应是较好的产品。这也是每天开展质量控制的基础。
(5)阴性血清的该CV范围实际说明了:以后每次对阴性血清检测得到的阴阳性判断限值(cut-off value)吸光度的变异范围。当然在实际使用中,应以2CV大小予以度量。
(6)但是,必须注意:一个好的ELISA产品,确定cutoff值时,对于HBsAg一定乘以2.1。对于那些不是这样计算cut-off值的,已经说明产品质量有问题,不应选择。
(7)还有,定性质量控制的规则只有一条:阴性一定是阴性,阳性一定是阳性;阴性不会变成阳性,阳性也不会变成阴性。所以,想到:如果在平时检测中,出现阴阳分不清的时候,那也是质量不符合要求的时候。一定要认真对待。
冯老师表示以上仅是自己最近在学习中的一些想法,是否在实际应用中有效,请各位多提宝贵意见。

来自: 临床实验室
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