精子DNA碎片检测——流式细胞仪法

精子DNA碎片检测——流式细胞仪法

江苏省人医生殖中心：孙方熙

目前临床针对不育患者精液的常规检查主要包括精子数量、浓度、活力和形态检测等。这些传统的精液分析不能有效地诊断不育和指导治疗，也不能准确预测精子的受精能力和妊娠结局。已有的研究结果证明，精子DNA完整性(DFI)也许更好反映男性生育力。

精子DNA碎片（DFI）是指精子在形成过程中受到有害因素（如氧化应激、吸烟、高温、药物等）影响，使完整的精子DNA造成损伤所致。DNA作为人类遗传信息的重要载体，其重要性不言而喻。遗传物质完整性显然对于成功妊娠和子代的健康是至关重要的，DNA 碎片程度反映精子遗传物质的功能性。

在我国，不孕不育症在育龄期夫妇中发病率达10%以上，并有逐渐增多的趋势。其中男性因素占40%～50%左右，精子原因居首位。在我院，年不孕不育门诊量达26万人次，其中有～50%的不孕患者需要进行辅助生殖技术助孕，很多是基层医院推荐的患者。助孕包括人工授精、体外受精与胚胎移植（IVF）、卵泡浆内单精子显微注射（ICSI）等，此类患者被推荐进行精子DNA完整性检测（每年1000例以上），医疗需求远远大于上述统计。

精子提供了一半的遗传物质（DNA），其完整与否可影响到受精卵原核的形成、受精卵卵裂能力、早期胚胎着床能力、后续胚胎的正常发育潜力及子代的健康；精子功能指标异常，临床上可导致不育、反复流产和助孕治疗成功率低等病症，所以精子DNA完整性受很多不利因素影响，例如发热、病毒感冒、服药、接触有害环境等，其意义和作用日益受到人们的重视，因此临床上对那些不明原因不孕、准备做人工授精（IUI）、或复发性流产的夫妇，建议进行该项检测来辅助评估精子功能。

根据临床统计，精子DFI指标过高，自然妊娠和人工授精助孕的成功率很低，大约<5%,因此如果复查精子DFI反复升高，治疗后也无效，可以考虑直接进行体外受精（IVF），成功率明显提高，而ICSI的成功率又略高一些，间接证明，这些患者的精子DFI高，也就是DNA碎片率高，可能是不孕的原因。

检测人类精子DNA完整性，计数至少5000个以上精子且重复计数2次。

1. 样品的收集、签收、处理（根据精子不同浓度进行相应的处理）；

   
   

2. 试剂准备；

   
   

3. 染色；

   
   

4. 用流式计数全面分析DNA完整性；

   
   

5. 数据分析，得出结论，判断并审核结果，发送报告；

   
   

6. 按规定保存标本，处理废弃物；

   
   

7. 接受相关临床咨询。

技术原理：

利用荧光络黄染料（吖啶橙）具有高度的异染性的特性，以插入的方式与双螺旋的DNA分子结合，染色后断裂的单链DNA精子在激光下呈红色荧光，而正常双链DNA精子呈绿色荧光。然后采用流式细胞术收集荧光信号，采用专用的软件分析检测结果。

精子DNA碎片化与精子发生过程中异常的染色体包装、氧化应激或细胞凋亡异常等有关，高DNA碎片化可能与不育、反复流产、助孕成功率低等有关。因此，随着DFI检测技术的日臻先进以及对精子DNA碎片认识加深，精子 DNA 碎片化程度被认为是一个可推荐的预测生育能力的参考指标