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血凝标本可以离心几分钟?

归去来兮 2024-6-7 03:56 PM 78人围观 科普


关于出凝血样本的离心时间和速度,是一个经常被讨论,但亦可能会被忽视的问题。为什么要离心?一是分离血浆;二是获得乏血小板血浆。

这里就提到了凝血体外检测用到的标本要求了,小编翻了翻试剂说明书,感兴趣的同学也可以自行查阅:
    
APTT:【样本要求】取9体积新鲜静脉血与1体积枸橼酸三钠混合,充分抗凝。参照NCCLS文H21-A3项下关于样本收集、处理与存储说明。

PTRP:【标本处理】室温下,1,500g离心不少于15min,分离获得乏血小板血浆(血小板计数<10×109)待检。

TT:【标本处理】室温下,1,500g离心不少于15min,分离获得乏血小板血浆(血小板计数<10×109)待检。

FIB-C:【样本要求】取9体积新鲜静脉血与1体积枸橼酸三钠混合,充分抗凝。参照NCCLS文H21-A3项下关于样本收集、处理与存储说明。

NCCLS就是CLSI临床实验室标准化协会的前身,关于APTT和FIB-C在里面有专门的项去规定,分别是H47和H30,所以可能说明书直接引用了:

H21-A3是1998年版本,2003年更新了A4,旧版本规定血小板计数小于10×109/L的血浆可以用于常规血凝试验(APTT、用于非肝素化病人的PT/INR和凝血酶时间);

新版本H4规定:血小板计数大于10×109/L的血浆可能并不适合另外一些凝集试验(如狼疮抗凝、磷脂抗体和肝素监控试验等)。

细心的同学发现了,上面的要求都提到了血小板计数,是不是搞懂了这个就明白了离心时间呢?
 
知彼知己,方可胸有成竹,经过了NCCLS标准的不断普及,咱们自己也根据实际情况有了自己的标准和规程。

卫生行业标准WS/T 359-2011文件,6.1标本的准备中有写:在分离血浆时,将装有标本的带盖试管在规定的速度和时间条件下(室温、1500g、不少于15min)离心,以得到乏血小板血浆(血小板计数(<10×109/L)。离心机应使用甩平式转头以减少血浆和血小板的重新混合。

在《全国临床检验操作规程》(第4版),第四章第一节《血栓与止血检验标本的采集和处理》描述:“缺乏血小板的血浆(PPP)可用于大多数的凝血试验,制备必须在大于或等于每分钟3000转条件下离心15分钟。”

第四章第五节《凝血因子的检验》中对APTT的试剂器材要求:“以109mmol/L枸橼酸钠溶液作1:9抗凝,3000r/min离心10分钟,获贫含血小板血浆,应使用塑料试管,防止血小板激活。”

统一要求了!看来这制约离心时间得到血浆的阻碍者就是血小板了!
    
其实了解了凝血过程下各凝血因子的途径就好明白为什么要使用乏血小板血浆了,都因为磷脂。

我们使用的血凝试剂如APTT,PT成分便有合成磷脂,通过血浆和体外磷脂孵育,在激活剂和Ca离子触发下,进行凝血过程。

而血小板上有磷脂,会参与凝血反应,要消除;活化的血小板还会释放综合肝素的血小板IV因子,影响抗凝检测,要消除;同时20%的V因子来源于血小板,影响测定时间,要消除;最常见的狼疮抗凝物会和血小板磷脂结合,导致假阴性,同时减少APTT时间,有实验显示,非标准乏血小板血浆情况下,中度狼疮抗凝物质存在会减少10sAPTT,要消除。

所以严格的离心力和离心时间就是为了得到上层乏血小板血浆,确保没有自身磷脂的干扰,得到最最准确的结果。

好了,了解完了各大标准15min刷屏和乏血小板血浆的重要性,大家应该知道凝血标本该离心几分钟了吧?

不过在第4版《全国临床检验操作规程》中,关于APTT可是只写了10min离心时间哦,小编查阅了大量文献论文,APTT 15min和10min的比较P值>0.05,差异无统计学显著性意义,同学们自行斟酌。

来源: 医家小二
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