找回密码
 立即注册

QQ登录

只需一步,快速开始

  • QQ空间
  • 回复
  • 收藏

​​你问我答:胶体金检测常见问题分析

归去来兮 2024-5-17 03:29 PM 341人围观 技术

什么是胶体金?




胶体金(colloidal gold)是氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,聚合成的一定大小的金颗粒。由于静电作用,金颗粒之间相互排斥而悬浮成为一种稳定的胶体状态,形成带负电的疏水胶溶液,故称胶体金。胶体金具有高电子密度,能与多种生物大分子结合,已成为继荧光素、放射性同位素和酶之后,在免疫标记技术中较常用的一种非放射性示踪剂。


胶体金检测平台常用的检测方法有双抗夹心法、竞争法、间接法等,不同检测方法检测原理及适合检测的物质不同,下面就系统地介绍一下这三种方法。

1

双抗夹心法


双抗夹心法是胶体金检测平台最常用的检测方法,主要用于检测比较大的生物分子及颗粒性抗原。双抗夹心法需要准备待测抗原的配对抗体,一个抗体用胶体金标记并固定在结合垫上,另一个抗体固定在NC膜的检测线(T线)上。另外,还需要准备能与金标抗体(即胶体金标记抗体)特异结合的二抗并固定于NC膜的控制线(C线)上。


当待测样品液体滴加到试剂条上后,通过层析作用,液体依次会运动至结合垫、T线、C线,每个阶段的反应如下表所示:

2

竞争法


小分子抗原很难制备得到配对抗体(分子量小,很难找到两个结合位点供两个抗体同时结合),因此小分子抗原无法用双抗夹心法进行检测。对于小分子抗原,通常利用竞争法进行检测。

使用竞争法的胶体金检测平台,在试剂条的结合垫上固定的是金标抗体,NC膜上T线固定的是大分子偶联的待测抗原(小分子抗原不能直接固定于NC膜上,因此需要通过化学方法把小分子偶联到BSA等大分子物质上再固定于NC膜上),C线上固定的是能与金标抗体特异性结合的二抗。

3

间接法


间接法主要用于检测抗体。如果胶体金检测平台使用的是间接法,则试剂条的结合垫上固定的是带有胶体金标记的Protein AProtein A能够与抗体非特异性结合),NC膜上的T线固定的是能与待测抗体特异性结合的抗原,NC膜上的C线固定的是抗Protein A抗体。

◆◆
胶体金检测常见问题分析

◆◆


1)在胶体金检测平台,CT线颜色不一致,检测结果如何判断?

  • 若是消线法,只要CT线在规定时间内都显色,不管颜色是否一致,就可判为阴性,T线不显色则判为阳性。

  • 若是比色法,T线比C线深,判为阴性,T线比C线浅或T线不显色,则判为阳性。

  • 对于夹心法产品,只要CT线在规定时间内都显色,就可判为阳性,T线显色越深,表示阳性越强。

2)在使用胶体金检测卡过程中,能否用水或者其他液体作为阴性样本对照?

不能。一方面因为检测样本成分很复杂,用水作为阴性对照没有参考意义。另一方面不同的产品检测体系不同,用水作对照容易造成假阳性或漏检等现象。

3)不同厂家的胶体金检测卡作比较时,能做几份标本就下结论判断哪家产品好吗?

不能。判断胶体金试纸条主要的指标有试剂的灵敏度、特异性、稳定性、精密度等指标,其中灵敏度和特异性是最关键的。灵敏度的考评就需要由不同样本做添加,还需要由高浓度的阳性样本做倍比稀释。特异性也需要做不同区域和特殊样本的检验。因为不同厂家的检测条虽然原理是相同的,但原料来源不相同,做几份是不能反映检测条的综合性能指标。

4)样品层析速度慢或者不发生层析

原因分析:

  • 加样量太少

  • 样本过于粘稠

  • 试纸条失效

建议处理方案

  • 增加加液量或滴加少量辅助液

  • 滴加少量辅助液,对样本进行预处理以去除沉淀物

  • 更换新试纸条重新检测,试纸条现拆现用

5)测全血时,有大量的全血样本析出,NC膜背景偏红,影响结果判读

原因分析:

  • 该试纸条NC膜严重受损或断裂

  • 使用已溶血的全血标本

建议处理方案

  • 更换新试纸条重新检测

  • 尽量使用新鲜全血检测

6)漏检率偏高

原因分析:

  • 检测时间太短,判断结果过早

  • 加样量太少,辅助液滴加过量,样本被稀释

  • 样本中被检物浓度太低

  • 个别样本中含有较为特殊物质,样本的pH值过高或过低

  • 该试纸条受潮,活性下降或失活

建议处理方案

  • 按说明书要求正确判读,建议对于较弱性或阴性样本可延迟

  • 按说明书要求正确加样或辅助液

  • 采用其他检测方法进行确认

7)检测结果假阳性率高

原因分析:

  • 该试纸条灵敏度偏高

  • 该样本含有特殊干扰物或已被污染

  • 在规定时间后判读结果

建议处理方案

  • 提前判读结果或更换新检测卡重新检测

  • 用其他检测方法确诊检测结果,确保样本不受污染

  • 按说明书要求正确判读结果,超出判读结果的时间范围,结果不准确

来源: 检验人生
我有话说......