25-羟基维生素D检测方法汇总

25-羟基维生素D行业标准中测定方法有三种

1、液相色谱串联质谱法 (LC-MS/MS)

LC-MS/MS结合了液相色谱的高分离性和质谱仪很强的分离鉴定的能力，被国际公认为检测25-羟基维生素D的“金标准”。LC-MS/MS能够同时分别测定25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3的浓度，具有高灵敏度、高特异性和高精准度等特点。但仪器操作复杂，对检验人员的专业度要求高，仪器昂贵，通量低，一般普通的医院检验科无法达到要求。

此方法主要适用于：

（1）初筛检测结果与临床情况不符合，需要精确定量的患者

（2）需要进行25-羟基维生素D2、D3分型定量的患者

（3）补充维生素D效果不理想的患者

（4）其他需求质谱法精确定量的患者

2、化学发光免疫法

化学发光法将化学发光测定技术与免疫技术相结合，使用连接有鲁米诺或吖啶酯衍生物的25-羟基维生素D与待检测样品中25-羟基维生素D竞争性结合包被了25-羟基维生素D特异性抗体的磁珠，反应终止后加入激发剂，使用光电倍增管检测产生的化学荧光信号。

由于其操作简单、快速、无同位素污染且容易实现自动化等优点，具有高灵敏度、干扰因素少、准确度高、能自动化批量操作、可控性强，适用于大规模的25-羟基维生素D营养状况的监测，但化学发光法需要配备特定的自动免疫分析仪，且只能测出25-羟基维生素D总的浓度。综合来看，化学发光法仍然是目前临床使用的主流方法。可用于初次筛查。

3、酶联免疫法(ELISA)

ELISA 法是将可溶性的抗原或抗体结合到固相载体上，样本中 25-羟基维生素D与其抗体结合，最后根据酶催化底物生成的有色产物颜色的深浅进行定性或定量分析。

ELISA法容易实现自动化操作，在节省人力、减少污染方面具有一定的优势，适合于在常规临床实验室开展。但是不能区分25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3，ELISA法基质敏感性，容易与其他非目标化合物发生交叉反应，降低检测的特异性，且酶促反应的结果受到反应温度、反应时间及加样准确性等因素的影响较大。

其他方法:

放射免疫法 (RIA)

RIA 法应用广泛，于 1985年首次提出，是最经典的测定 25-羟基维生素D水平的方法。该方法使用放射性核素(125I)标记的 25-羟基维生素D作为示踪剂，与待测样品中的 25-羟基维生素D竞争性结合抗体。RIA法应用广泛，对仪器要求较低，检测方法方便、准确度好，兼具灵敏度高和特异性强的优点。但是RIA法不能区分检测25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3，且存在放射性污染，对实验人员和环境都有危害，放射性废弃物的处理也十分复杂。

高效液相色谱法 (HPLC)

HPLC法最初采用正相色谱分离技术，利用硅胶柱分离，现多使用反向色谱。HPLC方法的特点在于能够有效地分离25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3，同时检测两者的浓度水平，分析速度快、稳定性、重复性好，准确度高。HPLC法的主要缺点是样品需求量大，样品处理复杂，通量小，仪器设备花费较高且需要专业人员操作，现已逐渐被LC-MS/MS代替。

胶体金免疫层析法

儿童是维生素D缺乏的主要群体之一，但是儿童血管纤细，依从性差，采集静脉血不是那么容易，市场上可见用胶体金原理采集末梢血检测维生素D的方法，虽然操作简便快捷、但存在方法学的局限性。