知识小课堂——PCR

聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR)是利用一段DNA为模板，在DNA聚合酶和核苷酸底物共同参与下，将该段DNA扩增至足够数量，以便进行结构和功能分析的一种反应。

核酸降解是DNA/RNA分子中的碱基和戊糖间的氮糖苷键，或磷酸二酯键在物理因素、化学因素和生物因素等作用下发生水解，使DNA/RNA链发生断裂。

通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时监控反应过程，结合相应软件可以对结果进行分析，通过标准曲线对未知模板进行定量分析，计算待测样本的初始模板浓度。

▶  初始DNA浓度越高，荧光达到某一值（阈值）时所需要的循环数越少（Cq值）。

▶  Log浓度与循环数成线性关系，根据样品扩增到阈值的循环数与已知起始拷贝数的标准品作出的标准曲线对比就可以计算出该样品的起始拷贝数。

❶ 更换试剂：更换新的试剂和水，用确保无污染的移液器分装备用。

❷ 清洁所有可能的污染源：实验台面，离心机，门把手等。

❸ 实验过程更加小心，采用前面提到的各种防止污染的方法。