检验医学与感染病学（五）——其他病原体感染的检验

        作者：黄山

 单位：贵州省临床检验中心

螺旋体是一群细长、柔软、运动活泼呈螺旋状的微生物。将标本置于暗视野显微镜下检出运动活泼、具有特殊形态的螺旋体具有诊断意义，除钩端螺旋体外，其他螺旋体如梅毒螺旋体、伯氏疏螺旋体、回归热螺旋体等尚不能人工培养，因而血清学诊断广泛应用于临床实验诊断。梅毒螺旋体属于密螺旋体属苍白螺旋体的苍白亚种，可引起人类梅毒。间接凝集试验、酶联吸附试验（ ELISA）检测患者血清的特异性抗体是常用的血清学方法。PCR检测可快速检出螺旋体特异基因片段，但目前尚不是常规的方法。

立克次体是一类仅在宿主细胞内繁殖的微生物（除罗沙利马体外），直接检出方法利用免疫荧光技术或PCR、探针杂交。分离培养常将标本接种于动物，观察动物发病情况（如雄性豚鼠阴囊肿胀、小鼠脾大），解剖动物取脾或阴囊睾丸鞘膜涂片，吉姆萨染色，可见双极浓染的紫红色小杆菌。外斐反应为非特异性血清学诊断试验。用于斑疹伤寒、斑点热和恙虫病的确诊。特异性的血清学试验有免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验和补体结合试验。

衣原体专营胞内寄生，可出现胞质内包涵体。直接显微检查细胞质内的典型包涵体对衣原体感染诊断有参考价值。用荧光素标记的衣原体单克隆抗体检测衣原体包涵体，也是一种好的检测方法。通过酶联免疫检测、核酸检测等非培养方法检测具有一定的优越性，结果迅速、操作简便。衣原体的分离培养和病毒培养一样，有鸡胚接种法、动物接种法和细胞培养法。

支原体缺乏细胞壁，呈高度多形性。革兰染色不易着色，直接显微镜检查无临床意义。分离培养支原体为确诊依据，培养基为牛心消化液加20%小牛血清和新鲜酵母浸液。不同种支原体在培养基中生长速度不一，解脲脲原体和人型支原体生长较快，利用培养后所见的典型菌落形态可作出初步鉴定，再以特异性抗血清作生长抑制试验（GIT）或代谢抑制试验（MIT）即可明确诊断。肺炎支原体和生殖道支原体初次分离缓慢，一般需10d左右才长出“荷包蛋”状菌落，故不适用于临床快速诊断。PCR技术目前已用于临床实验室的检测。

寄生虫寄生的部位对其致病性有着重大影响。一般来说，寄生于肠腔的寄生虫致病性最弱，寄生于血液或重要器官系统者致病性很强。寄生虫具有以某种方式破坏或逃逸宿主免疫应答的能力而便宿主的免疫系统不能清除病原体。寄生虫感染对免疫系统的影响是一个越来越令人关往的领域。对病原的免疫应答太弱而不能控制感染，寄生虫负荷过大，宿主会死亡；应答太强，也许能较好地控制寄生虫感染，但是免疫病理性反应增强，造成宿主组织损伤。因此，控制感染同时不造成严重组织损坏需要要抗寄生虫免疫应答的诱导和维持与对此应答的调节间的精细平衡。

每种寄生虫都在某个特定生活阶段通过一定生活方式排离宿主，以求得转换宿主个体而延续宗系。因而从血液、组织液、排泄分泌物或活组织涂片检查寄生虫某一生活阶段是最可靠的确诊方法，如从人粪便中检查蠕虫卵、肠道原虫滋养体和包囊，疟疾患者发作l~2次后在外周血中查找疟原虫，直肠镜活组织检查血吸虫卵。培养分离法不是常用的检测方法，但在阿米巴或弓形体感染时可用此方法查找经培养后的阿米巴滋养体或单细胞中的弓形虫。

免疫学方法诊断寄生虫在临床上广泛应用。除了经典凝集试验、沉淀试验、补体结合试验等外，近几年建立的酶联免疫吸附、酶联免疫印迹、斑点酶联免疫吸附试验等使试验的敏感性和特异性大大提高。利用DNA探针技术测定标本中某种寄生虫DNA片段和应用PCR技术扩增标本中可能存在的极微量的某种寄生虫DNA是目前发展的高敏感度的检测方法。

（一）疟原虫感染

疟原虫寄生于人体红细胞和肝细胞中，可引起疟疾。寄生于人体的疟原虫有间日疟原虫、恶性疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫4种。确诊疟疾有赖于显微镜检出疟原虫。近年来，检侧宿主血液、红细胞内疟原虫抗原和血清中特异性抗体等免疫学技术的开展，在临床诊断和分型中发挥了重要作用。抗原的检测常采用放射免疫试验和固相放射免疫抑制试验检测受感染的红细胞内的疟原虫抗原，主要用于恶性疟的诊断。但由于包被抗原为粗提抗原，放射性核素标记的疟原虫抗体不易标准化，故结果尚不够稳定。近年来，应用ELISA和双抗体抗原检测待测血清中的特异性抗体。

（二）华支睾吸虫感染

华支睾吸虫病又称肝吸虫病，是由华支睾吸虫寄生在人的肝、胆管内所引起的以肝胆病变为主的一种人畜共患的寄生虫病。华支睾吸虫的虫体抗原成分包括：表膜抗原、代谢抗原、全虫粗抗原和去膜虫体抗原，其中以代谢抗原敏感性较高。故目前华支睾吸虫感染的临床免疫学实验室检侧常采用Dot-ELISA法检测其特异性抗体，其敏感度、特异性较高。

（三）猪囊尾蚴感染

猪囊尾蚴病俗称“囊虫病”，是猪带绦虫的幼虫寄生于人体各组织所致的疾病。猪囊尾蚴病的免疫学实验室检测包括对其抗原及抗体的检测。

1.抗体检测

（1）IgG抗体：囊虫病患者血清中多种抗体均升高，其中以IgG增高最为显著。人感染囊尾蚴后10d即可检测到抗体，48d后达到高峰，并可持续160d以上。然而，IgG在治疗后一定时间内变化不显著，不能及时反映疾病的动态发展。

（2） IgG抗体有从出现、升高到逐渐降低的质和量的变化。

（3）IgE抗体：囊虫病患者可有IgE升高， IgE在脑囊虫病的病因学中起一定作用，过去常用的皮内试验即为检测IgE的方法。

2.循环抗原检测

人感染囊尾蚴后，体内可产生相应抗体，但抗体在体内持续时间比较长，甚至10年以上。因此，检测抗体只能证实机体曾感染过囊尾蚴，不能作为诊断现症患者的依据，也不能作为判断疗效的指标。循环抗原是虫体分泌物或其代谢产物，其半衰期短，循环抗原阳性表明体内有活囊尾蚴存在。