PCR检测中不容忽视的曲线

今早例行收到普通采血管送检乙型肝炎病毒核酸标本，运用PCR检测方法常规检测病毒载量。编号为2的标本首次试验荧光强度曲线如下图：

内标（VIC）通道CT值为24.78，FAM通道无结果。

同批次试验3个水平乙肝病毒核酸质控均在控，同批次检测3个水平标准品所得标准曲线如下图所示，相关系数为-0.999，扩增效率为112.54。

回溯标本信息，标本编号不存在“张冠李戴”。血清肉眼颜色如图所示：颜色淡黄清亮未见明显脂血、溶血、黄疸现象。

采血时同时采集送检了生化全套检查，结果如下图示。肝功能指标在参考范围内。

查看患者病历信息，病人否认"高血压、糖尿病、心脏病、肾脏病"等疾病史，否认"肝炎 、伤寒、结核"等传染病史，否认手术外伤史，否认输血史，否认药物过敏史，预防接种史不详。

面对扩增曲线异常，我们及时将血清用阴性质控品稀释10倍进行了复检。

复检后曲线如下图所示：

该标本稀释后乙型肝炎病毒核酸计算浓度为2.74E+7IU/ml，对数浓度为2.44，Ct值为8.41。

与此同时我们积极与临床免疫学检验专业组沟通，了解到该患者乙肝标志物结果（如下图），提示HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性，这个结果给了我们信心。

PCR曲线可分为基线期、指数期、线性期、平台期。

扩增曲线形状异常有许多表现形式，最常见的有扩增曲线不光滑、断裂或下滑、骤降等。当信号太弱时，一些仪器所配置的系统会自行校正，就会导致曲线不光滑，我们可以通过浓缩样本提高模板浓度重复试验加以解决。如果模板浓度太高，会导致基线终点值大于Ct值，扩增曲线断裂或下滑，我们可以通过减小基线终点，重新分析数据，或者如同此例稀释样本到线性范围后再检测，来解决这种状况。如果反应管在上机前没有充分离心而留有气泡，当扩增反应正在进行时温度升高，气泡破裂，则会导致荧光值骤降。