关于试剂反应过程中的反常问题

归去来兮 2023-1-3 04:48 PM 725人围观技术

在试剂研发过程中，可能遇到一些反常问题，举个例子，比如对于酶免试剂，我们包被1ug/ml和2ug/ml，反应曲线如下：

在某一段区间内，1ug/ml的反应强度是要高于2ug/ml的，这是为什么呢？我怀疑最有可能的原因和空间位阻有关系。

低浓度包被在反应前期给了包被抗体和酶标抗体足够的反应空间，高浓度的包被带来的位阻反而不利于前期的反应，只是带来了后期足够的反应容量。其实，这一点同样适用于免疫层析平台。很多时候我们发现1mg/ml的包被浓度在某一段区间内，反应强度要高于2mg/ml的包被浓度，有的时候表现为灵敏度的提升，有的时候则在整个反应区间都是如此。有些人解释说抗体包被浓度高的话，部分结合不牢固，反应过程中被样本冲走了。其实我觉得，2mg/ml的包被浓度根本不算高，NC膜的蛋白结合量远不止于此，可能不同蛋白与NC膜的结合性能不同，但我只能说，这不是主要原因。

并且，对于免疫层析，不知道大家有没有发现，有时候降低标记浓度，同样可以一定程度地提升灵敏度。这又是为什么呢？

图片解释了部分原因，也就是说达到一定的量后，抗体标记量过多其实对于灵敏度的提升并不会带来积极作用。这时候也许有人说，照你这么说抗体标记量越少越好喽，一个颗粒带一个抗体分子最高效率喽？理论上是这样子的，但是实际的标记过程不可能这么理想，再加上抗原抗体的反应也讲究一个碰撞概率，一个抗原跟带一分子抗体的颗粒和带两分子抗体的颗粒碰撞，概率上并不占优势。

实际上今天讲这几个点，并不是为了讲清楚什么，微观世界具体发生了什么我们也不清楚，研发人员主要还是要善于总结，勤于分析，乐于实践。

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来源: IVDdiagnosis

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