HSV病毒载体及应用（下）

这种rHSV-rc病毒可用于AAV病毒载体的规模化生产中。AAV病毒载体通用的包装方法是用三质粒共转染HEK293细胞。这种方法的缺点是需要大量提取多种质粒DNA，同时扩大规模比较困难。为此我们课题组利用HSV1-rc病毒作为辅助病毒来提供AAV载体包装所需要的辅助功能，建立了一套“载体细胞/辅助病毒”策略的高效AAV载体包装系统。

然而，这样的重组HSV1病毒具有很强的复制能力，并且保留了疱疹病毒所有的编码基因包括5个IE基因，IE3（ICP4）, IE2（ICP27），IE1（ICP0）、IE4（ICP22）、Us1.5基因。所破坏的UL2或UL44不影响病毒在体外细胞的感染和传代，对于病毒的毒性影响也不大。因此作为研究工具具有一定优势，但作为基因转移载体却有许多缺点。因此必须经过改造使其成为复制缺陷性病毒并且删除致癌基因后才能用于基因治疗。其次，为了增加病毒载体插入外源DNA的容量，除了可以删除病毒的非必需基因外，还可以进一步删去部分或全部必需基因，这些必需基因的功能由辅助病毒或包装细胞系反式提供。

■2、扩增子载体（amplicon HSV1 vector）

是一种仅携带了HSV1病毒的复制起点和包装信号序列的质粒载体。将外源基因表达单位插入这样的质粒中，转染细胞后，在HSV1辅助病毒超感染下，质粒DNA上的复制起点可以被HSV1病毒产生的蛋白识别而进行滚环复制；同时质粒上携带的HSV1包装信号可被识别而将复制的多拷贝扩增子DNA包装到HSV1病毒颗粒中去。获得的病毒液是扩增子病毒与辅助病毒的混合物。为了减低其中辅助病毒的毒性，可以采用一种温敏型的HSV1病毒（HSV1 tsK株）作为辅助病毒，这种病毒在31℃可产毒性复制，而在37℃很低复制，从而大大减轻在动物体内实验时的神经毒性。

这种载体的优点是不携带任何病毒编码的基因，仅仅有病毒的包装信号和复制起点序列，而且一个病毒颗粒中有多个拷贝的外源基因，具有很高的表达水平。缺点在于辅助病毒无法分离去除，造成细胞毒性。因此，针对减少或减弱辅助病毒想出了很多办法。为了减低其中辅助病毒的毒性，可以采用一种温敏型的HSV1病毒（HSV1 tsK株）作为辅助病毒，这种病毒在31℃可产毒性复制，而在37℃很低复制，从而大大减轻在动物体内实验时的神经毒性。

■3、潜伏型HSV载体

潜伏型HSV载体的目的是在潜伏的HSV1基因组中长期稳定地表达转染的基因。然而，在潜伏状态的HSV病毒基因组中，外源启动子与内源性启动子一样被下调。据文献，构建潜伏型HSV1载体有两种策略。一是采用启源强启动子插入LAT区；另一是采用LAT启动子。这种载体可能并不成熟，没有得到广泛应用。

四、HSV载体的应用

• 神经系统基因导入的有用工具（因其嗜神经特性）；

• 选择性破坏肿瘤细胞（溶瘤病毒）；

• 预防性或治疗性疫苗。

参考文献：

吴小兵，第六章 单纯疱疹病毒载体。 863丛书，≪基因治疗≫[M]. 北京: 科学出版社, 2001。