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实战经验!新型冠状病毒PCR实验室的改进及管理

归去来兮 2021-12-23 134人围观 机构


作者:肖涛  陈珊珊
单位:上海市金山区亭林医院检验科



我院为疫情防控期间定点收治医院,也是上海市新型冠状病毒核酸检测点;现将我院新型冠状病毒PCR实验室的改进过程及经验总结如下几点,供其他新型冠状病毒核酸检测实验室的检验同仁们参考。



一、检测人员的配置

2020年,国家卫健委要求二级以上医院建设新型冠状病毒核酸实验室。我院自开展新型冠状病毒核酸检测以来,发热门诊及住院病人和陪护人员的核酸检测标本数量逐渐攀升,尤其在冬季及临近春节等时间节点,返乡人员都需要检测核酸,据此新型冠状病毒核酸检测的人数剧增,标本数目也随之增多。我院新型冠状病毒核酸检测实验室的工作人员已经满足不了当前飙升的工作量。

疫情防控常态化,本科室再次派有一定工作经验、有资质的检验技术人员报名参加上海市临床检验中心举办的上海市医疗机构第三期临床基因扩增检验技术人员上岗证培训班培训学习,其培训内容由理论培训和实验操作组成,培训合格后发放PCR上岗证

取得PCR上岗证的检验技术人员,再由本院新型冠状病毒核酸实验室组长对其进行理论强化培训及实践操作指导。跟随核酸检测人员熟悉检测流程,了解实验室个人生物安全防护要点、生物的危害性、防护服穿脱的规范性、试剂配置、标本的处理、提取仪及扩增分析仪的使用、结果的判读、标本保存、垃圾的处理以及空间的消毒处理等方面的知识,进行岗前理论培训及操作培训,考核合格方可上岗。这一方法有效地解决了疫情防控中核酸检测人员缺少的问题。


二、仪器设备

疫情防控常态化,一刻也不放松。进入寒冷的冬季,病人及陪护人员都需要进行新型冠状病毒核酸检测。临近春节,返乡回家过年的人增多,需要检测新型冠状病毒核酸的人也随之增多,我院新型冠状病毒核酸实验室的核酸提取仪和扩增分析仪已不能满足现有的标本状况。

所以,本实验室添增自动核酸提取仪和全自动核酸扩增分析仪等设备。设备的增加满足了当前日常核酸检测的需求,也解决了设备短缺这一短板,大大缩短了病人及陪护人员的等待时间,也为疫情防控工作的完善增进了一小步。

三、监控设备

为实时监控及规范管理新型冠状病毒核酸实验室的操作流程,分别在实验室的试剂准备区、标本制备区、扩增及产物分析区等位置安装了全方位高清彩色监控摄像头,实时监控实验区内的一切动态情况。主要监控试剂配备、样本处理、加样、核酸提取、核酸扩增分析、垃圾处理、消毒等核心部位的一系列操作情况,监控视频至少完整无缺地保存一个月。这样能有效保证操作的规范化、标准化,也保证了结果的真实性、准确性。


四、对讲机

新型冠状病毒核酸实验室在建设投入的使用过程中,样本制备区与试剂准备区和扩增区及产物分析区间的沟通不方便,以往都是敲敲传递窗引起试剂制备区或扩增及产物分析区的注意,再就是用记号笔写在纸上透过可视窗给对方看(缺什么、需要配多少试剂等),这样的交流方式属实不方便。

根据大家的讨论交流,在实验室之间配备对讲机,解决了实验室区与区之间的沟通问题。

五、质控

实验质控监测主要是监测操作过程及检测系统中的重要质量保证措施控制及结果报告的规范性。在开展新型冠状病毒核酸实验室以来,本实验室根据《国家卫生健康委办公厅关于医疗机构开展新型冠状病毒核酸检测有关要求的通知》,开展质控为3个质控数,即阳性、阴性、空白三个对照。这三个质控随机放于标本中一起检测,监测整批的标本检测数据结果是否在质量控制的范围内,监测操作人员在操作过程中是否存在异常等。

为规范新型冠状病毒核酸实验的管理,有效防控疫情,《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册(试行第二版)》监测核酸在采样、运送、震荡、加样等检测过程中的质量控制,根据上海市临床检验中心督查的要求,将原来每板检测三个质控(阳性对照、阴性对照、空白对照)改为每批次随机5个质控样本,即2个不同种得弱阳性质控(质控A、质控B)、3个阴性对照(1个前一日的阴性标本、1个生理盐水、1个试剂盒里的阴性质控)。五个质控样本弥补了三个质控检测中的一些不足,更有效地监控了新型冠状病毒核酸检测各环节的质量控制及管理。


六、结果复检

新型冠状病毒核酸检测在质控监测正常的情况下,如样本结果曲线(N、ORF)起跳或翘尾时,及时按照SOP复查机制对该样本进行复查,重新提取核酸进行复检,用双试剂、双设备复检,增加检出率和准确度,在同个检测板上增加复测孔,结果出来时及时分析判读,并登记复查结果及Ct值。

在新型冠状病毒核酸上岗证检测人员、核酸提取仪、扩增分析仪、不同厂家试剂等因素增加后,检测异常的复查机制有所改进。当N基因、ORF基因等曲线起跳或翘尾,并结合开始起跳点Ct值分析时,对该标本核酸提取板上加双孔提取核酸,同标本在双试剂、不同扩增分析仪上按新、老核酸在同个板上对其标本进行复检(新核酸即新提取的核酸,老核酸即第一次提取的核酸)

经过复检后,再次判读分析结果的曲线及Ct情况,并在登记本上登记复核的结果及Ct值并报告结果;不同检测试剂、检测系统等检出限、准确率互相弥补。

七、消毒

新型冠状病毒为单股正链RNA病毒[6-7],归于新型β属冠状病毒,基因组序列约为29000bp,含10个基因,能编码10个蛋白质[8-9]。根据新型冠状病毒的结构及对紫外线热敏感等属性,可在56度30分钟内有效灭活,消毒剂方面75%乙醇、含氯消毒等也是能短期有效灭活病毒[5-2]


自新型冠状病毒核酸实验室投入使用以来,实验室内使用已知的75%乙醇及新配备的含氯消毒剂在实验工作始末用含氯消毒剂、75%乙醇喷洒在工作桌面、生物安全柜、传递窗、加样枪等物品上进行消毒。含氯消毒剂有一定的腐蚀性,喷洒3-5分钟后需要用毛巾或吸水纸擦拭,以免时间过长而腐蚀含铁的仪器及设备。

新型冠状病毒的主要传播方式是经呼吸道飞沫、接触等进行传播[10],为防止核酸实验室环境受污染,保护工作人员自身安全,保证检测结果不受影响,故本实验室新购进“核酸清洁液”。核酸清洁液为A、B两瓶各500ml的溶液,是由两种单独使用的没有毒性的溶液组成,将两种溶液等量混合后即时起效,可在短时间内消除各种物体表面及空气中的高水平DNA/RNA污染,并完全降解至灵敏PCR不能检出的水平。其使用方法如下:先在工作台、仪器、塑料或玻璃容器、PCR管、移液器等需要清洁的物品表面喷洒TreliefTM Solution A,然后立刻喷洒B液,静置5min (若目的是灭菌,延长至15min)后,用蒸馏水润洗表面,然后用干净的吸水纸擦干。

本实验室工作台面、生物安全柜、加样枪、核酸提取仪、扩增分析仪、离心机、冰箱、传递窗等采用“三重”消毒方法来确保消毒效果。在工作始末,分别按消毒顺序各消毒一次,即核酸清洁液→含氯消毒剂→75%乙醇;工作结束后,空气也需要消毒,打开移动紫外线消毒车的开关调至60分钟,生物安全柜内打开紫外线,人退出实验区,打开计时的紫外线消毒开关,紫外线消毒60分钟;要达到消毒效果需要紫外线照射时间长[11];地面的消毒在每天实验结束后,将84消毒液与纯净水按一定比例配制(现配制),装入喷洒壶内,对新型冠状病毒核酸实验室的三个实验区及走廊地面等喷洒消毒;经过层层的消毒,桌面、空气、地面等均达到清洁效果,避免任何污染存在。消毒是有效预防医院感染的重要指标之一[12-13]

结语

本新型冠状病毒核酸实验室自检测开展以来,主要是在增加检测人员配置,增加核酸提取仪、扩增分析仪及添加不同厂商试剂,实验区内安装监控摄像头,配备对讲机,质控数目的变化,结果复查的改变,消毒等几个方面对新型冠状病毒核酸实验室进行不断改进,还对SOP文件进行修改等。

本次改进在疫情防控常态化中起了很好的效果,操作的规范性、标准化以及结果的准确性及有效性等方面得到了提升,更好的服务于临床病患及陪护人员、社会人员等;同时也为其他新型冠状病毒核酸实验室的持续性进步发展提供了参考。

【参考文献】

[1]国家卫生健康委办公厅,国家中医药管理局办公室.新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案(试行第五版):国卫办医函〔2020〕103号[EB/OL].(2020-02-05)[2020-02-06].http://www.gov.cn/zhengce/zhengceku/2020-02/05/content_5474791.htm.

[2]中华人民共和国国家卫生健康委员会,疾病预防控制局.中华人民共和国国家卫生健康委员会公告:2020年第1号[EB/OL].(2020-01-20)[2020-02-15].

[3]李六亿,吴安华.新型冠状病毒医院感染防控常见困惑探讨[J].中国感染控制杂志,2020,19(2):105-108.DOI:10.12138/j.issn.1671-9638.20205362.

[4]WHO. WHO Director-General's remarks at the media briefing on 2019-nCoV on 11 February 2020[EB/OL].[2020-02-15]. https://www.who.int/dg/speeches/detail/whodirector-general-s-remarks-at-the-media-briefing-on-2019- ncov-on-11-february-2020.

[5]新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)[J]. 中国感染控制杂志,2020,02:192-195.

[6]Masters PS. Coronavirus genomic RNA packaging[J]. Virology, 2019, 537: 198-207.

[7]徐超,刘容枝,方丽,李冉,韩从音,吕允凤.新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂临床试验要求解析[J]. 中国医药生物技术,2020,03:225-229.

[8]国家卫生健康委员会办公厅. 新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)[EB/OL]. (2020-03-03)[2020-03-05]. http://www.nhc.gov.cn/yzygj/s7653p/202003/46c9294a7dfe4cef80dc7f5912eb1989.shtml.

[9]Huang CL, Wang YM, Li XW, et al. Clinical features of patients infected with 2019 novel coronavirus in Wuhan, China[J]. Lancet, 2020, 395(10223): 497-506.

[10]上海市医学会检验医学分会.新型冠状病毒核酸和抗体检测临床应用专家共识[J].国际检验医学杂志,2020,41(14):1665-1669.

[11]中华人民共和国卫生部.医疗机构消毒技术规范:WS/T 367-2012[S].北京,2012.

[12]WHO/CDS/CSR/EPH. Prevention of hospital-acquired infections; a practical guide[S]. WHO, 2002.

[13]Ling ML, Ching P, Widitaputra A, et al. APSIC guidelines for disinfection and sterilization of instruments in health care facilities[J]. Antimicrob Resist Infect Control, 2018, 7: 25.


来自: 检验医学网
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