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手把手教你如何看“生化反应曲线”

归去来兮 2021-4-1 04:33 PM 2718人围观 技术


前言

生化反应曲线是整个生化反应过程的记录,通过查看反应曲线我们可以知道这个结果是否可靠,也可以发现一些仪器故障(试剂针加样不足、冲洗机构冲洗问题),也能提醒我们光源灯能量不足(俗称,换灯泡),也能查看速率法项目是不是底物耗尽。
那么,到底怎么去看生化反应曲线呢?

01

生化反应曲线基础理论



分光光度仪原理,运用的是朗伯-比尔定律:A=Kbc
A为吸光度,K为摩尔吸光系数,它与吸光物质的性质及入射光的波长λ有关,c为吸光物质的浓度,单位为mol/L,b为吸收层厚度,单位为cm。Lambert-Beer 定律适合于任何均匀非散射的介质,当相应的比色杯每一次通过光路系统时,光路系统会测量并记录下相应的吸光度。光路系统可以测量后分光后12个波长的相应吸光度。
常用波长: 340, 376, 415, 450, 480, 505, 546, 570, 600, 660, 700, 800nm ,多数检测项目都使用双波长检测方法。(可去除干扰物对检测结果的影响)


全自动生化分析仪常用的方法:终点法和速率法。
1、终点法:(一点终点法、两点终点法)
被测物质在反应过程中完全被转变为产物,到达反应终点,根据终点吸光度的大小求出被测物浓度,称为终点法。
该法称为平衡法更为恰当。从时间-吸光度曲线来看,到达反应终点或平衡点时,吸光度将不再变化。终点法参数设置简单,反应时间一般较长,精密度较好。
 一点终点法在反应到达终点,即在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时选择一个终点吸光度值,用于计算结果。
结果计算公式:待测物浓度CU=(待测吸光度AU-试剂空白吸光度AB)×K
  K为校准系数  
两点终点法在被测物反应或指示反应尚未开始时,选择第一个吸光度,在反应到达终点或平衡时选择第二个吸光度,此两点吸光度之差用于计算结果。
2、连续监测法(速率法):
是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期(各两点间吸光度差值相等)的吸光度值,并以此线性期的单位吸光度变化值(ΔA/min)计算结果。
可以确定线性期并计算ΔA/min,根据此值再准确地计算酶活性,因而使自动生化分析仪在酶活性测定方面显著地优于手工法。连续监测法也可用于测定呈线性反应的代谢物浓度,一般是某些基于酶法测定的代谢物。
    酶活性(U/L)=ΔA/min×理论(或校准)K值。 
    代谢物浓度CU=ΔA/min×校准K值。 

1.反应曲线是什么?


炒菜,应该大家都会吧?


其实,生化项目的检测过程跟炒菜比较相似,炒菜的基本流程是:放油→放菜→放盐,如果每隔18秒,对菜的味道进行打分并记录,再把各个点连接绘成一条曲线的话,炒菜的反应曲线大致是这样的,见下图:



如果只是把油→菜→盐,按顺序放进锅里,这一锅菜应该是没法吃的,对吧?至少得在放油、菜、盐的时候用锅铲搅拌混匀一下,对吧?于是炒菜的反应曲线变成了这样,见下图:



那么,对应的生化项目检测(以奥林巴斯AU系列为例)是这样的:首先,仪器会向反应杯加入试剂1(R1),紧接着加入样本(S), 搅拌混匀,3分钟后加入试剂2(R2),搅拌混匀。在这个过程中,仪器会每隔18秒测试一次吸光度并记录,总共28(0-27)个点,然后连接成线,就是我们所看到的反应曲线,见下图: 



所以,反应曲线是项目检测整个过程的记录,相当于是一个静态的录像。


2.反应曲线怎么看?

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来源: 临床检验医学
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